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分子生物学在获取中药有效成分方面的研究与应用 摘要：中药有效成分的提取是中药研究的一个重要任务， 一种药材经过复杂的分离提取后获得的有效成分往往十分微量。如何获得更多的有效成分是中药研究的重要内容。分子生物学技术能为此研究提供新的方法，研究人员通过寻找中药有效成分的相关功能基因，并通过基因工程的方法对其进行高效表达，大大提高了中药有效成分的得率，并降低了提取成本。 关键字：分子生物学 有效成分 中药 石斛 当今，以分子生物学理论为基础，以基因工程为主导的生物技术正以其巨大的活力推动着生命各学科的发展。进入21世纪，这一高新技术，在中医药研究领域中亦开始陆续被推广应甩。综合近几年国内外的研究 成果，主要有以下几个方面： 1 分子生物学与中药鉴定 中药的传统鉴定方法主要依靠基源鉴定、 性状鉴定、 显微鉴定以及理化鉴定四大类方法。单纯依赖于以上传统的鉴定方法，已经不能有效防止中药的混淆代用和故意伪制的发生。基于 DNA分析的分子鉴定技术，具有特异性高、准确性高、重现性好的特点，已成为传统鉴定方法的重要补充手段为中药品质标准规范管理的国际化开创良好开端。 2 分子生物学与中药资源保护 传统的药用植物资源研究，主要采用形态分类学方法划分物种。由于此方法仅建立在个体形状描述和宏观观测的水平上，得到的结论并不完善。通过引入分子生物学方法， 分析药用植物的遗传特性以及建立遗传图谱，使植物分类和资源的研究更加科学化[1]。肉苁蓉属名贵中药材，主要来源植物为荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉，目前野生肉苁蓉资源已仅剩几 个主产区。 通过提取样本DNA，运 用 RAPD技术对荒漠肉苁蓉野生居群和管花肉苁蓉 野生居群进行研究，利用POPGENE32版软件分析其群体的遗传多样性。结果显示，两种肉苁蓉的遗传多样性均呈低下，不利于其适应环境变化的能力。 通过分析肉苁蓉遗传多样性的差异，为如何保护肉 苁蓉提供了科学的实验遗传学依据[2]。 3 分子生物学与中药的机理研究 中药的机理研究通过应用分子生物学技术已深入到几乎是最根本的基因转录水平， 并在该水平上对中药的疗效获得了一定解释，但整体上还处于探索阶段。已有的研究主要是应用如核酸分子杂交、RT -PCR技术等考察“单基因” 的技术，应用如DD -PCR、DNA阵列等研究多基因的技术的报道较少。 中药调节机体平衡的特点决定了对基因转录的影响很可能是对多基因的协同影响， 如对补肾生血方的系列研究已表明此方的功效与影响EPOR、 SCF、c-myc、Bcl- 2、GM-CSF基因表达有关。因此，应用研究多基因表达的技术考察对多基因的协同影响将是未来中药基因转录水平作用机理研究的主要方向。相信随着现有技术的不断发展和完善、新技术的出现及多种技术相结合加上疾病细胞分子水平研究的深入，复杂的中药作用机理会逐步得到阐释，中药的疗效和可能发现的新功效将从机理上获得科学依据，为中药获得像西药一样的市场准人权提供有力的支撑[3]。 4.分子生物学与中药有效成分的获取： 虽然随着科学技术的进步，中药材的提取方法得到了飞速发展，一些新的提取方法如超声提取技术、超临界流体提取技术、微波辅助提取技术、半仿生提取技术等得到一定的应用，但各种方法不但有自身存在的缺点，更重要的是它们不能从根本上增加药材有效成分的含量。因此，在一味的追求更好的提取方法的同时，也应该在提高药材自身成分含量上作出相应的研究[4]。本文以下主要介绍该方法的研究与应用概况。 该方法目前主要是利用理化因子定向诱导药材某个药用部位，如根茎、种子等， 获得稳定的药材药用部位突变体， 并运用cDNA -AFL技术对突变体表达进行分析；以Mrna - cDNA克隆法，单克隆抗体等构建以获得差异表达 mRNA反义基因； 构建相应的载体，转化药材，分析转基因石斛中的成分石斛碱的变化 ， 对反义基因进行筛选，确定石斛碱功能基因； 并进行基因的全长克隆， 从而获得药材有效成分相关功能基因， 再进一步对运用基因工程方法对药材有效成分进行大规模生产打下基础。 单克隆抗体是由单个细胞(杂交瘤细胞)增殖而形成的细胞克隆所产生的完全均一的、单一特异性的抗体。因此，制作出针对中药不同成份的单克隆抗体，然后用来鉴定中药的成份或测定其含量的多少。是一种简便而又高灵敏度的、重复性好的测定方法。而且，单克隆抗体不仅可以作为测定试剂．还可以制成亲和层析柱，迅速地、高特异性地从复合物中提取出相应的有效成份[5]。 石斛为传统名贵中药材，为兰科(Orchidaceae)石斛属( Dend obium Sw)， 以新鲜或干燥的茎人药 ， 我国76种石斛属植物中有30多种作为药用，著名的有铁皮石斛、金钗石 斛、霍山石斛等， 其具有“ 滋阴养胃、清热生津、润肺止咳、明目强身”之功效，《神农本草经》将