厚樸内生真菌的研究(Ⅰ)菌种分离及其鉴定.docVIP

厚朴内生真菌的研究（Ⅰ）：菌种分离及其鉴定 【关键词】? 厚朴；内生 HYPERLINK 真菌；多样性 　　摘要：从两个不同来源的厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的茎中，分离获得内生真菌48株，经显微形态观察，鉴定为1纲、3目、6科、16属。不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异。 　　关键词：厚朴；? 内生真菌；? 多样性 　　Study on Endophytic Fungi in Magnolia officinalis Rehd. et Wils.（Ⅰ）:Isolation and Identification of Endophytic Fungi 　　　Abstract：48 strains of endophytic fungi were isolated from the stem of Magnolia officinalis Rehd. et Wils. They were morphologically identified belonging to 16 genera, 6 families, 3 orders and 1 class. The result of the experiment has shown that quantity, species and distributing of the endophytes varied in Magnolia officinalis Rehd. et Wils. of different habitat. 　　Key words：Magnolia officinalis Rehd. et Wils.；? Endophytic fungi；? Diversity ??? 　　厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils. 是著名的川产道地药材, 属国家二级保护的珍惜濒危药用植物。用于湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮咳喘等病症［1］。厚朴多以复方入药，用量较大；而厚朴原植物生长周期长，曾出现厚朴资源匮乏，采用环剥技术确保进行了枝皮剥除的植株能继续生长的方法来保存资源的现象。现在厚朴虽已进行大面积规模化种植，但从长远观点看，厚朴资源仍显不足。植物内生真菌能够产生与宿主相同或相似化学成分这一特性在一定程度上可以缓解植物资源短缺问题。厚朴内生真菌的研究未见报道。笔者对厚朴内生真菌进行了菌株分离、鉴定等工作。现将研究结果报道如下。 　　1? 材料与方法 　　1.1? 材料 　　1.1.1? 来源 采集四川峨眉山唐山健康植株的枝条；四川都江堰市虹口乡健康植株的枝条作为样本。原植物经鉴定为厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.。 　　1.1.2? HYPERLINK 培养基? PDA HYPERLINK 培养基（马铃薯 HYPERLINK 培养基）（用于培养）、PDA HYPERLINK 培养基＋青链霉素混和液（用于分离）、查氏 HYPERLINK 培养基（NaNO3，K2HPO4，KCl，MgSO4，FeSO4，蔗糖）（用于鉴别）、促孢 HYPERLINK 培养基（KH2PO4，KNO3，MgSO4?7H2O，KCl ，淀粉，葡萄糖，蔗糖）（用于鉴别）。 　　1.2? 方法 　　1.2.1? 内生真菌的分离用自来水将新鲜植物表面洗净，稍干后切成适宜长度的小段，在75％酒精中浸泡3～5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干。然后用无菌刀片将组织表皮削去，分别取韧皮部、木质部和髓部切成5 mm×5 mm×1 mm的小块贴放于分离培养基上，置25～28℃恒温箱中培养3～20 d，待 HYPERLINK 培养基上各植物组织周围长出菌丝后，采用尖端菌丝挑取法对所分离的内生真菌进行纯化，即得内生真菌。 　1.2.2? 内生真菌的鉴定采用插片培养和点植法，对分离获得的银杏内生真菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定。分类检索参照文献［2,3］。 　　2? 结果与讨论 　　2.1? 厚朴内生真菌种群多样性分析 从厚朴中共分离出48株内生真菌，经显微形态观察，鉴定为1纲、3目、6科、16属。厚朴内生真菌种群组成见表1。 　　表1?? 厚朴内生真菌种群组成（略） 　　由表1可以看出，厚朴内生真菌在种类上存在着极其丰富的多样性特征。在厚朴内生真菌中，从数量上看，以曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）和镰孢属（Fusarium）为优势种群，包含菌株分别占总菌株数的31.3％，18.8％，14.6％。部分属种代表性显微形态特征参见图1～6。 　　2.2? 不同采集地点厚朴内生真菌的分布从不同地点采集的