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杉木双花鞘花寄生提取物自由基清除能力研究 　　摘要：以95%乙醇、丙酮和乙酸乙酯为溶剂分别对杉木双花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]寄生进行冷浸提取，用DPPH和ABTS体系评价杉木双花鞘花寄生提取物清除自由基的能力。结果表明，杉木双花鞘花寄生各提取物对DPPH自由基和ABTS自由基均具有清除能力，其中95%乙醇和丙酮提取物对自由基的清除能力较强，可作为抗氧化剂的天然来源之一。 　　关键词：双花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]；杉木寄生；抗氧化；DPPH自由基；ABTS自由基 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3625-03 　　生物体内存在的过量氧自由基与蛋白质、脂类化合物、多糖、核酸等大分子发生氧化反应，造成细胞损伤和引起组织结构的非正常变化，进而引发心血管疾病[1]、衰老[2]甚至癌变[3]等问题。抗氧化性物质可淬灭自由基，阻止因过量自由基和生物大分子作用而引起的一系列链式氧化过程。尽管通过化学手段合成的物质如叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）、没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）等具有优良的抗氧化性质，且在食品及其他领域已经得到了广泛应用，但近年研究发现，这类物质对人体呼吸酶活性产生一定的不利影响，甚至还有致畸作用，一旦进入人体就会产生潜在危害[4]。因此寻找安全、可靠的抗氧化物质成为近年世界各国精细化工领域研究的重点内容之一。 　　双花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]别名二苞鞘华、八角寄生等，为桑寄生科鞘花属植物，常寄生于杉木属、樟属、五月茶属、灰木属或壳斗科植物，民间主要用于治风湿痹症、关节疼痛、筋骨拘挛、腰膝酸软[5]。植物的抗氧化活性多与酚类及黄酮类物质有关[6]，双花鞘花的同属植物鞘花寄生（Macrosolen cochinchinensis）可分离出酚及黄酮类物质[7，8]。目前，寄主为杉木（Cunninghamia Lanceolata）的双花鞘花（以下均称为杉木双花鞘花寄生）的抗氧化活性鲜有报道。因此，通过分析杉木双花鞘花寄生乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和乙醇提取物对DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）、ABTS[2，2′-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]自由基的清除能力，研究杉木双花鞘花寄生不同溶剂提取物的抗氧化活性，旨在为天然抗氧化物质的开发利用提供一定的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　材料：双花鞘花，经广西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定为桑寄生科鞘花属植物双花鞘花，其寄主鉴定为杉科杉木属植物杉木，将其茎枝自然晾干，粉碎。 　　仪器：8453型紫外可见分光光度计（美国安捷伦公司）、BS224S电子天平（德国赛多利斯公司）、恒温水浴锅（黄骅市新兴仪器厂）、RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。 　　试剂：DPPH、ABTS购于美国SIGMA公司，其他试剂均为国产分析纯。 　　1.2 方法 　　1.2.1 杉木双花鞘花寄生的部位提取 将杉木双花鞘花寄生全株阴干，粉碎后各称取100 g，用800 mL 95%乙醇冷浸3 d，过滤。滤渣加等量溶剂同法再提取1次，过滤，合并2次滤液。滤液置旋转蒸发仪中减压蒸馏，回收溶剂，残留物低温真空干燥至干，得杉木双花鞘花寄生乙醇提取物浸膏（EE） 5.181 g，得率为5.18%。同法制备丙酮提取物浸膏（AE） 3.203 g，得率为3.20%；乙酸乙酯提取物浸膏（EAE） 1.400 g，得率为1.40%。 　　1.2.2 清除DPPH自由基能力测定[9] 取0.15 mL不同浓度（0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL）杉木双花鞘花寄生提取物，分别加入8 mL 0.004%（m/V）DPPH溶液，室温放置10 min，以不加提取液的DPPH为空白对照，在最大波长517 nm处测定吸光度，直到平衡为止。根据下列公式计算各种提取液对DPPH自由基的清除率：SC=（1-A1/A0）×100%，式中，SC为清除率，A1为加提取物后DPPH溶液的吸光度；A0为未加提取物时DPPH溶液的吸光度。 　　1.2.3 清除ABTS自由基能力测定[10] 用去离子水将ABTS配制成7 mmol/L准备液，然后往准备液中加入过硫酸钾固体，使此准备液的过硫酸钾浓度变为2.45 mmol/L。室温避光放置2 d备用。将ABTS溶液用磷酸盐缓冲液（PBS）稀释，在732 nm下测得吸光度为（0.70±0.05），将30 μL不同浓度（同