染色体G显带标本的制备素材.ppt

染色体G显带标本的制备 二、实验原理 常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。 染色体带型的形成主要取决于DNA、核酸结合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的碱基组成及其与结合蛋白形成的特定结构对染料分子的作用。 可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一，其与蛋白结合紧密而不易被胰酶分解，因而深染；而G阴性带区富含G-C对，蛋白与其结合较疏松，易被胰酶消化分解而不易着色。（。。。深染区由许多二硫键交联，浅染区则缺乏二硫键、多硫氢键。。。） Giemsa染料是天青-伊红染料，着色首先取决于二个天青分子同蛋白结合，在此基础上再结合一个伊红分子，通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的蛋白。 试剂及器材 试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水。 器材： 37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头。 实验步骤 取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。 实验步骤 待胰酶液温度升至37℃后，将染色体标本片