片仔癀对保护肝害作用的研究.docVIP

片仔癀对CCL4肝损害的保护作用研究 （作者：姚大卫） 编者按：中成药作为传统中医药的重要组成部分，为中华民族的繁衍生息、人类的身体健康做出了重大贡献。即使是在现代医学高度发达的今天，中医中药仍然如同璀璨明珠，大放异彩。中医中药的神奇疗效让人们把目光投向这块中华瑰宝。中药是中华民族的宝贵财富,中药现代化是中药科学发展的必由之路。为传承、发扬中医药文化，漳州片仔癀药业与香港中文大学姚大卫教授合作，开展片仔癀保肝作用机理的研究。该项目被列入香港创新及科技基金项目，是内地第一个中药品种被列入、并获得香港政府无偿提供的专项研究资金。片仔癀保肝研究取得积极成果，研究论文发表在世界著名的丹麦医学杂志《药理与毒理》，引起西方医学界的极大关注。 研究证明：片仔癀对肝损害有显著的保护作用，且其保护肝脏的作用可能通过刺激肝细胞重要信号传导通道各种反应因子而产生。 作者简介：姚大卫，英国皇家生物学院院士、英国皇家卫生学院院士、英国动物学院院士、美国解剖学院院士，香港中文大学生物医学学院终身教授。 片仔癀对CCL4肝损害的保护作用研究 摘要：目的探讨片仔癀对肝脏保护作用的机理。方法：以四氯化碳造成小鼠急性肝损伤为模型，观察片仔癀的保肝作用，并利用分子生物技术，通过肝细胞的培养来测定片仔癀对重要信号传导因子的作用，以了解片仔癀保肝作用机理。结果片仔癀可显著减轻四氯化碳对肝的损害，可显著降低其血浆ALT和AST水平，肝脏组织学改变明显减轻．能够刺激肝细胞使反应因子API、CRE、NFKB形成增加。结论片仔癀有明显的保肝作用，其作用机理可能通过调整肝细胞的重要信号传导通道的活动能力而取得的。 关键词：片仔癀；保肝作用；机理i信号传导 片仔癀主要由三七、蛇胆、麝香、牛黄组成，具有清热解毒、活血化瘀等功效。近几年国内外许多人应用片仔癀治疗急、慢性肝炎取得很好的效果，且最近对肝炎的治疗提出了新的中医观点：采用活血化瘀法进行治疗的原则，而片仔癀不仅是很好的活血化瘀药而且又有很好的利胆作用。为了考察其作用，以确证其疗效并运用分子生物技术研究其作用机理，为该药作用提供有力的依据，本文特对其保肝作用机理进行研究，现将研究结果报告如下。 1 试验材料 1．1 片仔癀 由漳州片仔癀药业股份有限公司提供，用时研磨成试验所需的相应浓度的悬浊液，4℃贮存备用。 1．2 四氯化碳(CCL4) 分析纯，临用时用豆油配成溶液，Dose：2.37mg/g 1．3 AST and ALT试剂Sigma公司。 1．4 测试AST and ALT 仪器 UV 1601 Spectrophotometer。 1．5 实验动物 ICR小鼠由香港中文大学实验动物部提供，重约22～27g SPF级 2 实验方法 2．1 急性肝损伤 取体重24～28g的雄性小鼠30只，实验前，小鼠禁食不禁水6h，按体重随机分成3组，每组l0只小鼠，分设空白对照组、CCL4组、片仔癀组(O.5g/kg)。片仔癀组每12h灌胃给药1次，每次灌胃容量均为0.1ml／10g，共绐药4次。空白对照组和模型对照组同时灌服等容量的生理盐水。在第三次给药后1h，除空白对照组小鼠外，其它两组小鼠按2μg/g b.w的CCL4腹腔注射5O% CCL4玉米油溶液。于12h后各组再给药1次。然后于ip.CCL4后24h，各鼠取血，测定血清ALT和AST，取肝脏作进一步处理。结果(见表1) 取肝脏，从每个肝脏样品中各切出大约lcm 大小的小块．立刻置于10%甲醛中，以备做切片。取这些小块在一系列升级酒精中脱水，之后在二甲苯中清洗。再把小块包埋在石蜡中，用切片机切成8μm厚的片段，用苏木精和伊红给这些片段染色。在显微镜下观察各鼠的肝细胞情况。结果见病理报告。 图1 小鼠肝细胞情况 a 正常组 b 片仔癀组 c CCL4组 d 片仔癀组+CCL4组 2．2 利用分子生物学技术研究片仔癀对肝细胞的保护作用机理采用分泌碱性磷酸酶化验以测定片仔癀对肝细胞的反应因子形成的影响。片仔癀对肝细胞作用的传导剖面分析是用汞牌通道剖面系统铡定的。相关因素：API、NFκB、E—box、CRE、GRE、SRE和HSE，这些反应因子均和一个TAL 的促进器和分秘碱性磷酸酶报告器相关连。把肝细胞播种在96格的培养盘中，通过Lipofect AMINETM2000，把300ng每单位构成物与5OμL的DMEM 培养基和0.4μL的LF2000混合传进培养盘的每室肝细胞中。传输物在传进培养盘24h后取出，一个培养盘加进新鲜的含有500μg/ml片仔癀的DMEM 培养基，一盘加进新鲜的未含有片仔癀的DMEM 培养基。培养48h后，25μL的表层浮物从96格的培养盘每格中取出。一套SEAP检测剂(Clontech)用来测定