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  • 2016-11-23 发布于北京
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肽键 肽键中的C-N键具有部分双键性质,不能自由旋转。 在大多数情况下,以反式结构存在。 肽键的特点是氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用。 组成肽键的原子处于同一平面。 蛋白质的一级结构(Primary structure)包括组成蛋白质的多肽链数目。多肽链的氨基酸顺序,以及多肽链内或链间二硫键的数目和位置。其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序,它是蛋白质生物功能的基础。 1. 样品必需纯(97%以上); 2. 知道蛋白质的分子量,其误差允许在10%左右; 3. 知道蛋白质由几个亚基组成; 4. 测定蛋白质的氨基酸组成;并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 5. 测定水解液中的氨量,计算酰胺的含量。 (1)测定蛋白质分子中多肽链的数目。 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系,即可确定多肽链的数目。 (2)多肽链的拆分。 由多条多肽链组成的蛋白质分子,必须先进行拆分。 可以通过加入盐酸胍方法解离多肽链之间的非共价力;应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。 (3)二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下,用过量的?-巯基乙醇处理,使二硫键还原为巯基,然后用烷基化试剂保护生成的巯基,以防止它重新被氧化。 (4)测定每条多肽链的氨基酸组成,并计算出氨基酸成分的分子比; (5)分析多肽链的N-末端和C

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