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第五章發酵产物的分离纯化
第五章 发酵产物的分离纯化
下游加工亦称发酵后处理,是指从发酵液或酶反应中分离纯化目的产物并加工成成品的过程。
第一节 下游加工过程概述
一、下游加工过程的重要性:1. 获得商业产品的关键环节。2. 拥有市场竞争力的重要保证。
二、下游加工过程的特点
1. 发酵液是复杂的多相系统,属非牛顿液体,从中分离所需产品困难大。
2. 发酵产品在培养液中具有浓度低,稳定性差,对酸碱等外界环境十分敏感,容易失活。
3. 下游加工过程代价昂贵,产品回收率不是很高。
4. 发酵过程复杂,要求下游加工工艺应具有相当的适应性,以确保最终产品的纯度和质量。
三、下游加工工程的一般流程
1.发酵液的预处理和固-液分离。2.产物的初分离3.产物的高度纯化4.成品加工
第二节 发酵液的预处理与固-液分离
一、发酵液的一般特征
1. 含水量高2. 产品浓度3. 悬浮物颗粒小,密度与液体相差不大 4. 固体粒子可压缩性大 5. 液体黏度大,大多为非牛顿型流体 6. 产物性质不稳定
二、发酵液预处理的目的和要求
1.预处理的目的
(1)改变发酵液的物理性质,促进悬浮液中分离固形物的速度,提高固液分离器的效率
(2)尽可能使产物转入便于后处理的某一相中(多数是液体)
(3)去除发酵液中部分杂质,以利于后续各步操作。
2.发酵液预处理的要求:
(1)菌体的分离
(2)固体悬浮物的去除
(3)蛋白质的去除
(4)重金属离子的去除
(5)色素、热原质、毒性物质等有机杂质的去除
(6)改变发酵液的性质
(7)调节适宜pH值和温度
三、发酵液预处理的方法:1. 重力法2. 热处理法3.等电点法4. 絮凝法
1. 重力法
在工业上用的较多的主要是离心和过滤。过滤常用板框真空吸滤或电动筛等,离心和过滤能否顺利进行取决于很多因素。一般温度高,压力大,发酵液粘度小,滤布选用适当,助溶剂适宜,搅拌都可以提高过滤速度。
2、加热法
降低悬浮液的黏度,除去某些杂蛋白,降低悬浮物的最终体积,破坏凝胶状结构、增加滤饼的空隙度。不适用热敏性的物质
3、等电点法
调节溶液pH至等电点处,可使两性电解质所带净电荷为零,相邻分子之间由于没有静电斥力而趋于沉淀。适用于氨基酸、蛋白质和其他两性物质的沉淀分离。
4. 凝聚和絮凝法
原理:电解质将胶体粒子表面上的电荷中和,减少存在于胶体粒子间的静电斥力,使范德华力占优势,这样胶体就会凝聚成较大、较密实的粒子(凝聚)。
或在某些高分子絮凝剂存在下,基于架桥作用,使胶粒形成粗大的絮凝团使之更容易过滤(絮凝)。
常用的凝聚方法:在稀溶液中加入电解质以促进凝聚。试剂包括酸、碱、简单电解质和合成的高分子电解质。
常用的絮凝剂:明胶、甲基纤维素、多聚丙烯酸、聚胺衍生物、氯化钙、磷酸氢二钠
影响絮凝的因素:絮凝剂的添加量、发酵液的pH、絮凝剂的分子量、搅拌转速、搅拌时间
四、发酵液的相对纯化
1. 高价无机离子的去除
去除钙离子:通常使用草酸。但由于草酸溶解度较小,不适合用量较大的场合,可用其可溶性盐,草酸价格昂贵,注意回收。
去除镁离子:加入三聚磷酸钠,与镁离子形成络合物。用磷酸盐处理,也能大大降低钙离子和镁离子的浓度。
去除铁离子:可加入黄血盐,使其形成普鲁士蓝沉淀而除去。
2. 杂蛋白质的除去
(1)沉淀法
①蛋白质在酸性溶液中,能与一些阴离子,如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀;
②蛋白质在碱性溶液中,能与一些阳离子如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。
(2)吸附法 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。
(3)变性法 蛋白质由有规则的排列到无规则结构的变化过程成为变性。变性的蛋白溶解性小。使蛋白质变性的方法有:加热,调节pH,加酒精等有机溶剂或表面活性剂等 。
变性法的局限性:加热法只适合于对热较稳定的目的产物;极端pH也会导致某些目的产物失活,并且要消耗大量酸碱;而有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。
五、固-液分离过程及设备简介
意义:固-液分离过程下游加工的重要环节,用于发酵液的预处理和生物产品的纯化、精制等环节。
方法:常用的方法有过滤、离心。此外还有膜分离、双水相萃取和扩张床吸附等方法。
影响发酵液固-液分离的主要因素:菌体的大小、形状及发酵液的黏度,还有发酵液的温度、pH值、加热时间等。
1. 过滤:用过滤介质将悬液中的固形颗粒与液体分离的过程。
常用的过滤方式:加压过滤和真空过滤
典型设备主要有:板框压滤机和鼓式真空过滤机
(1)板框压滤机
1)优点:①板框压滤机的过滤面积大;②过滤推动力(压力差)能较大幅度地进行调整,并能耐受较高的压力差;③结
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