荧光原位杂交技术的发及在植物中的应用.doc

细胞遗传学课程论文 题目：荧光原位杂交技术的发展及在植物中的应用 荧光原位杂交技术的发展及在植物中的应用 摘 要: 荧光原位杂交技术fluorescence in situ hybridization,FISH）是20世纪80年代末发展起来的一种非放射性原位杂交技术。该技术因其具有灵敏度高、特异性强、定位准确、快速有效、安全直观等特点而被应用于很多领域本文简要介绍了荧光原位杂交染色体制片技术探针类型探针标记方法，概述了荧光原位杂交技术在基因定位，远缘杂种的鉴定及外源染色质的检测应用。关键词：荧光原位杂交技术；染色体制片技术探针标记方法基因定位The development of fluorescence in situ hybridization and its application in plant Abstract:?Fluorescence in situ hybridization(FISH) is a non radioactive in situ hybridization technique developed in the late 1980s. Because of its characteristics:high sensitivity, strong specificity, accurate positioning, fast, safe and effective, it can be used in many fields.This paper briefly introduces the development of FISH in plant including the chromosomal technique, probe type and labeling method, then summarizes the application of FISH in gene mapping, identification of the distant hybrid and detection of the alien chromatin, etc. Keywords: fluorescence in situ hybridization; chromosomal technique; probe method; gene mapping 前言荧光原位杂交技术是20世纪80年代末发展起来的一种非放射性原位杂交技术其基本原理为：根据核普酸碱基互补配对原则, 使荧光标记的探针序列与靶DNA序列进行杂交, 然后用合适的检测方法将荧光信号检出, 达到基因定位的目的。因其具有灵敏度高、特异性强、定位准确、快速有效、安全直观等特点而被应用于很多领域。自从Rayburn1985年首次将原位杂交技术应用于植物染色体研究后该技术便在植物学研究中得到了广泛的应用。主要是由于以下几方面的原因：①FISH 的灵敏度接近同位素标记探针杂交[-4]，在安全性，空间分辨率，速度和探针的稳定性等比放射性同位素标记探针杂交更具优越性；②运用不同荧光色素标记的探针可同时检测一个细胞核中种或更多的核甘酸序列；③DNA 序列能被定位在目标范围从载玻片上分散的中期细胞染色体到悬浮固定保存细胞三维结构的间期核中[]；④探针标记和荧光试剂从商业上可得，而且使FISH过程直接可靠；⑤荧光显微镜和数字成像系统在过去20 多年中不断改进；⑥特殊种属的全基因组，完整染色体，染色体亚区域或单拷贝序列能在多种探针混合运用情况下出现特异信号；⑦未标记的基因组DNA 通过探针预杂交抑制重复序列，对定位象柯斯质粒这样一类含大插入探针的特定序列是至关重要的。来。FISH技术的程序较复杂，主要流程包括染色体标本的制备，探针的制备、纯化与检测，染色体与探针的变性，原位杂交，杂交后洗脱，杂交信号的检测和放大，荧光显微镜观察、照相。 随着FISH 技术的不断发展，衍生了染色体原位抑制（CISS）技术、间期核FISH、引物原位标记或DNA 合成（PRINS）技术等，并且发展出M-FISH、3D-FISH、Rx-FISH 技术、CGH 以及近年来微阵列技术（Microarray）等。同时，原位杂交靶目标从中期染色体发展到DNA 纤维，提高了FISH 技术的分辨率，即2 个不同DNA 探针能够被检测到的最小距离，由1 Mb 发展到1 kb，这更进一步拓展了FISH 技术的应用领域，成为分子细胞遗传学的一项代表技术。 近二十年，随着该技术的不断发展，在植物的研究中已得到了广泛的应用，例如植物基因的染色体物理作图杂种中亲本染色体的鉴定，外源染色体或染色体片段的检测物种进化及亲缘关系的探讨转基因材料中外源基因的定位。本文主要介绍了荧光原位杂交探针类型、探针标记方法的发展、