超干燥技術对福建柏种子活力的影响.docVIP

超干燥技术对福建柏种子活力的影响 1实验材料：当年采集福建柏种子、贮藏一年的福建柏种子 2实验目的与猜想： 2.1不同脱水方法对福建柏种子的影响：通过设置不同脱水方法，分别测定、福建柏种子各含水率水平的发芽力与活力、脱氢酶活性、a-淀粉酶、呼吸强度等相关指标的影响，以期确定一种最适合其超干贮藏的脱水办法，为福建柏种子更好的贮藏、延长其贮藏寿命提供依据。 2.2种子脱水对破除种子休眠的影响：基础实验发现，经贮藏一段时间的福建柏种子的萌发率较新采集的福建柏种子要高20%（当年的发芽率30%左右，贮藏一年的50%左右），且经人工适度脱水后的福建柏种子的萌发率也有所提高。猜想：福建柏种子是否存在一种休眠机制，而自然脱水或人工脱水在破除种子休眠方面可以起到一定的作用？通过测定福建柏种子人工脱水处理过程中内源ABA、GA、MDA含量变化，拟合为与种子含水量相关的曲线，得出种子脱水与休眠的关系，为破除种子休眠提供相关依据。 2.3福建柏种子的耐脱水机理研究：在脱水过程中会对福建柏种子造成损伤，种子通过自身的耐脱水机理可以在一定程度上避免损伤，从而保持活性。查阅大量文献猜想可能通过对①非还原糖的积累，以维持干燥条件下膜和蛋白质的稳定性，促进细胞质中玻璃化的形成；②在脱水过程中防止、忍耐或修复自由基攻击的能力；③被ABA诱导的保护性LEA蛋白。因此，可以通过测定福建柏不同含水量水平中非还原塘的组分变化情况、脱水蛋白（热稳定蛋白？可溶性蛋白？）的变化情况，推测可能有关的福建柏种子耐脱水机理。 2.4福建柏种子超干燥超低温贮藏研究：大量试验证明植物细胞如果能耐受超低温保存前的脱水处理,就能在快速冷冻过程中存活。设计实验在超干燥处理的前提下，再进行快速冷冻处理。 3实验方法： 3.1不同脱水方法对福建柏种子萌发及相关生理生化指标的影响 3.1.1脱水方法：参照伍贤进等的方法稍加修改。脱水方式分为：硅胶脱水，将种子置于装有活化硅胶的干燥器中（放入50℃烘干箱？）分别脱水1、3、6、12、20；②氯化钠脱水，将种子置于RH75%（饱和氯化钠溶液）的密闭容器中分别脱水3、6、12、20、30h；③硝酸钾脱水，将种子置于RH90%（饱和硝酸钾溶液）的密闭容器中分别脱水5、12、20、30、42h。上述3种方式均在相同室温下进行。 3.1.2种子含水率测定：根据国家标准GB2772-81《林木种子检验方法》有关规定进行。采用105℃烘干法测定。（根据脱水方法不同设置3个对照组，每个对照组分别设置从10%、9%……1%的十个不同含水率的基准水平） 3.1.2种子发茅率及活力测定：种子发芽试验按(GB2772- 81)《林木种子检验方法》有关规定进行。每日记录发芽种子数，最后计算种子发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数。 发芽指数： 其中，Gi：发芽指数，Gt在时间t的发芽数， 活力指数： 其中，Vi：活力指数，L：平均芽长，Gi 3.1.3电导率测定：在25℃下将林木种子浸泡8h测定电导率，再在沸水浴中煮15min冷却至25℃时测定其电导率，每个处理4个重复，电导率仪采用DS- 11A型。 3.1.4脱氢酶活性测定：采用TTC定量法。用45℃的温水自然冷却浸种24h，取胚4个重复，每个重复100粒种子，用0. 2%的TTC溶液在35℃黑暗环境下染色4-6 h，染色后，倾出TTC溶液，用蒸馏水冲洗胚2-3次，移入研钵加入少量分析纯石英砂和丙酮进行充分研磨，把研液转到10mL容量瓶中，用丙酮溶液冲洗干净，将冲洗液也转移到容量瓶中，并定容至10 mL摇匀，将部分提取液倒入5mL离心管中，在3000r/min的离心机中离心7min，倾出上清液用721型分光光度计在490nm波长下测定光密度值，在标准曲线中查出还原态TTC值。 3.1.5a-淀粉酶测定：用45℃的温水自然冷却浸种24h，取胚4个重复，每个重复100粒种子，把胚移入研钵中加入少量分析纯石英砂和5mL研磨缓冲液冲洗，转移到试管中，将提取液放在70℃恒温中加热20 min，在4000r/ min离心机中离心5min，倾出上清液，用研磨缓冲液定容至10mL，作为酶制剂，吸取1mL酶制剂放入试管中，加入1mL淀粉溶液和1mL反应缓冲液，摇匀放在37℃的恒温水浴中保温，经过0,5,10min，分别吸取0.3 mL的反应混合液放入试管中，迅速加入1mL显色剂，加入3mL蒸馏水，充分摇匀，用721型分光光度计在620 nm的波长下测其光密度值。 淀粉酶（ 其中，?OD620(t) α：每次试验样品混合液中含淀粉毫克数（0.3mL混合液含有0.1mL淀粉溶液，含淀粉0. 1 mg) ; v：提取的酶制剂总体积(10mL) ： t：反应时间； v1：每次测定用酶制剂体积(0.3mL混合液含有0.1 3.1.6呼吸强度测定：呼