现代生物技术综合实验探讨.pptVIP

现代生物技术综合实验（生技11级） 周玉萍 短号：662138 本课程实验项目（54学时） 实验1、质粒DNA的制备与质量鉴定 （包含琼脂糖凝胶电泳） 实验2、质粒DNA的片段化与分离 实验3、大分子DNA的制备和质量鉴定 实验4、PCR反应 实验5、PCR产品纯化及克隆 实验6、感受态细胞制备及转化 实验7、利用不同的方法筛选和鉴定转化子 （综合设计实验，18学时） 实验一 质粒DNA的制备与质量鉴定 一、实验目的 学习并掌握基因工程操作技术中最常用的载体质粒DNA的提取方法。 二、实验原理 在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会完全分离，当加入中和缓冲液时，变性质粒DNA 又恢复到原来的构型；而线性的大分子量细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶性复合物，通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中，再用酚/氯仿处理，可去除残留蛋白质，混杂的RNA可用RNA酶(RNAase)消除。 三、实验材料与主要试剂 实验材料： 含pEGFP质粒的大肠杆菌DH5α 主要试剂：