間苯二酚法测定蜂蜜中果糖的研究.docxVIP

间苯二酚法测定蜂蜜中果糖的研究 [摘要]对利用间苯二酚法测定蜂蜜中果糖的条件进行了优化选择，并对其应用性进行了评估．结果表明，果糖与间苯二酚、盐酸共热生成的红色络合物在483 nm处吸收峰最高；当间苯二酚质量浓度为2g／L、盐酸浓度为5 mol／L、加热温度为100 oC、加热时间为7 min、果糖的质量浓度在0．2—2 g／L之间时，果糖的质量浓度与吸光值具有良好的线性关系，回归方程为Y=0．035+0．564 8x，r2=0．999 4． [关键词]蜂蜜；果糖；间苯二酚；测定 引言 蜂蜜是一种良好的保健食品，它的主要成分是糖类，糖类的组成是衡量蜂蜜质量的重要指标 ．由于缺乏合适的检测方法，蜂蜜中果糖通常很难测定，目前关于这方面的相关报道也较少．因此，建立蜂蜜中果糖的测定方法对蜂蜜质量控制及检测具有重要的意义．常用的果糖分析方法有旋光法 、薄层色谱法 ]、高效液相色谱法 】、气相色谱法 及分光光度法 等．旋光法虽然快速准确，但取样量大；薄层色谱不适于定量分析，而常只是作为定性分析的手段．高效液相色谱及气相色谱法结果精确可靠，但设备昂贵、需要专门的分析检测人员、分析成本高，不适于现场检测．分光光度法在测定果糖时有多种运用形式，紫外分光光度法由于在紫外区易受蜂蜜中其它成分(如小肽、硝酸根蔗糖)的干扰而准确性不高．间苯二酚法 是一种常用的酮糖和醛糖定性鉴别方法．本文拟建立利用间苯二酚显色反应分析果糖方法，并对该方法测定蜂蜜中果糖的适用性进行评价，为利用间苯二酚法分析检测蜂蜜中的果糖提供条件参数． 1 材料与方法 1．1 材料 5种蜂蜜样品购自福州市红星农场． 1．2 试剂与仪器 果糖、间苯二酚、盐酸均为分析纯，CARY50型紫外可见分光光度计(美国瓦里安公司)． 1．3 原料及标准样品的处理方法 原料或标准样品——加入适量间苯二酚及盐酸溶液——定容——水浴加热至100℃并恒温一段时间——迅速冷却——测定吸光值． 2 结果与讨论 2．1 实验条件的优化与选择 2．1．1 吸收曲线波长的确定 配制一定质量浓度的果糖，加入适量间苯二酚及4 mol／L的盐酸溶液，煮沸6 min，迅速冷却后在450~550 nm之间进行光谱扫描，结果如图1所示．果糖用间苯二酚在酸热条件下显色后的最大吸收峰483 nm处，因此本实验选用此波长作为测量波长． 2．1．2 间苯二酚质量浓度对果糖测量的影响 固定果糖质量浓度为l g／m，盐酸浓度为4 mol／L，调节间苯二酚与果糖的质量浓度比分别和2．0，100℃显色6 min后测定吸光度，结果如图2所示．当问苯二酚与果糖质量浓度比低于1．0时，吸光度随比值的增大呈线性增加；当间苯二酚质量浓度大于果糖质量浓度时，再增加间苯二酚的质量浓度，吸光值增大的幅度明显变小，基本处于一个相对稳定的值．所以，在实际测量时应适当控制间苯二酚的质量浓度稍大于果糖质量浓度． 2．1．3 盐酸浓度对显色反应的影响 固定果糖质量浓度为l g／g，间苯二酚质量浓度为2 g／L，调节盐酸浓度分别为l、2、3、4、5、6、7、8、9 moL／L，100℃反应6 min，测定吸光度，结果如表l所示．由表l可见，盐酸浓度会对显色反应产生重要影响，当盐酸浓度低于8 mol／L时，吸光值随着盐酸浓度的增加而增加，盐酸浓度超过6 mol／L后就开始出现沉淀，显色反应后需过滤才能测定吸光度．因此在实际应用时既要避免盐酸浓度过低致使显色反应不灵敏，又应避免盐酸浓度过高而出现沉淀，适宜的盐酸浓度应在4—6 mol／L之间． 2．1．4 显色时间对显色反应变量的影响 配制一系列果糖质量浓度为l g／g、间苯二酚质量浓度为2 g／L、盐酸浓度为5 mol／L的混合溶液，在lO0 oC下分别显色2、4、6、8、lO、l2、l4、l6、18 min，测定其吸光值，结果如图3所示．可见，显色时间对显色反应也会产生重要影响，显色时间在6—8 min之间，吸光值最大；当显色时间小于6 min时，吸光值随显色时间的增加而增大；当显色时间大于8 min时，吸光值随显色时间的增加而减少．因而在实际操作时，应控制显色时间在6—8 min之间． 2．2 工作曲线的绘制 配制一系列的果糖溶液，控制间苯二酚的质量浓度为2 g／L，盐酸的浓度为5 mol／L，显色温度为100℃ ，显色时间为7 min，测定吸光值与果糖质量浓度之间的关系，实验结果见图4．当果糖质量浓度在0～2 g／L时，果糖的质量浓度与吸光度之间有着良好的线性，其线性方程为Y=0．035+0．564 8x；r =0．999 4，说明回归方程很好地拟合了实验结果． 2．3 回收率及精密度的测定 配制一系列果糖标准样溶液，控制间苯二酚的质量浓度为2 g／L，盐酸的浓度为5 moL／L，显色温度为100℃，