鴿Ⅰ型副黏病毒PL分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究.docVIP

鸽Ⅰ型副黏病毒PL分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究 摘要：根据GenBank报道的鸽Ⅰ型副黏病毒F基因序列设计了一对引物，以鸡新城疫病毒PL分离株基因组为模板，通过RT-PCR扩增出了1.66kb左右的F基因片段，序列分析表明PL株F基因与国内外17株鸽Ⅰ型副黏病毒或鸡新城疫F基因核苷酸序列的同源性为76.3-98.6%。将PL株F基因插入真核表达载体PCDNA3.1V5HIS中，构建了真核表达质粒PCDNA3.1-PPMV-1-F，将构建的真核表达重组质粒免疫1月龄非免疫新城疫的乳鸽，剂量为100μg/羽，2周后加强免疫1次，并在免疫后0d、7d、14d、21d、28d翼下静脉采血分离血清，用间接ELISA分别检测各组血清抗体，ELISA检测结果表明：真核表达质粒免疫乳鸽后产生的抗体与鸽Ⅰ型副黏病毒F蛋白发生特异性反应，在免疫第7d开始有抗体产生，在免疫14d抗体水平达到最高，之后抗体水平开始下降，说明F蛋白具有很好的免疫原性。以真核表达重组质粒免疫乳鸽第28天以100倍鸡胚半数感染剂量(EID50)的F基因同源病毒对所有乳鸽进行攻毒。结果显示重组质粒免疫组和鸽新城疫蜂胶灭活苗免疫组的免疫保护率分别为33.3%和100%，显著高于生理盐水组和PCDNA3.1V5HIS空载体组，鸽新城疫蜂胶佐剂灭活苗组的免疫保护率也显著高于重组质粒组。表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选