感受态细的制备及重组质粒的转化.ppt

感受态细胞的制备及重组质粒的转化 重组DNA技术的基本工具 受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能允许含有外源DNA的载体分子通过的细胞，即感受态细胞(competent cell) 。 转化过程所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体。 影响转化效率的因素 实验原理 本实验以E.coli JM109菌株为受体细胞，并用CaCl2处理使其处于感受态，然后与pMD19-T-X重组质粒共保温，实现转化。由于重组质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Ampr )，可通过Amp抗性来筛选转化子。 如受体细胞没有转入pMD19-T-X重组质粒，则在含Amp的培养基上不能生长。 能在含Amp培养基上生长的受体细胞（转化子）已导入了重组质粒。 实验仪器、材料 1 ．超净工作台 2 ．高速离心机 3 ．恒温摇床 4 ．恒温培养箱 5 ．恒温水浴锅 6 ．制冰机 7 ．移液枪 实验材料、试剂 1．大肠杆菌JM109菌株 2．重组质粒 3．1.5mL 离心管，Tip头 4．试管、培养皿 实 验 安 排 一、受体菌的培养 二、感受态细胞的制备 1、取1mL菌液于1只1.5mL离心管中，置冰浴5min，10000rpm离心 1min （每班需做对照管至少1管）（从这一步开始，所有操作均