01-4 Zimm plot 数据处理 ASTRA 6.docxVIP

单机试验 -- Zimm Plots数据处理主要内容:采用多角度激光光散射仪单机模式（batch mode）测定样品分子量；硝酸钠溶液体系测定右旋糖苷（400kDa）的 Mw， Rz，A2。任务目标:熟悉多角度激光光散射仪与ASTRA 软件 ；掌握单机模式下数据的采集操作；优化各参数获取 Zimm Plot；单机试验下能测定哪些量 ?平均重均分子量（weight average molar mass）、z均方半径（z-average rms radius）第二维利系数（A2） 。何种条件下使用单机试验？无法使用SEC ，例如需要使用不同类型的SEC柱或不同溶剂条件 ；SEC柱可能改变样品性质，例如SEC柱可能对高分子量样品具有剪切效应；或柱填料与样品具有较强相互作用；测定平衡常数（equilibrium constant）或反应动力学常数（kinetics）监测反应过程如何进行单机试验测定？激光池子类型选择： 流通池（flow cell），光散射瓶（scintillation vial）（仅适合HELEOS），微量比色皿（microCuvette）。 已知量：dn/dc，样品浓度（concentration）（注：可使用RI 或 UV测定样品浓度）试验方案（池子类型：流通池）要求：每一浓度对应的LS信号稳定（平台） 不同进样方式：HPLC 泵 + dndc进样系统（定量环体积：1000 μL）；注射泵（Syringe pump）+ 注射器（syringes）；梯度合成进样系统：自动配制样品浓度梯度，并自动进样。要点: 避免气泡与灰尘进入流通池。试验细节:要求: 获取 Zimm plot 时，样品浓度梯度至少需要5个；使用注射泵或HPLC 泵+ DNDC 进样系统；流速测定： ~ 0.5 mL/min；采集纯溶剂初始/最末基线值；归一化标样（Normalization standard）：右旋糖苷30kDa（5 mg/mL）；5个样品浓度（浓度 0.2 ~ 2.0 mg/mL ）；过滤头:使用0.02 μm 过滤头（syringe tip filter）过滤溶剂；使用0.2 μm 过滤归一化标样；可使用0.45 μm 过滤高分子量样品；注射器（Syringes）水相溶剂 – 带橡胶头注射器适合所有高分子溶液。有机溶剂 – 禁止使用带橡胶头注射器；避免样品污染。讨论话题：请确认已通过进样系统将溶剂或样品注入DAWN 或 miniDAWN仪器流通池中。查看或通过forward laser monitor 判断流通池中是否存在气泡。评价流通池清洁程度。 使用各向同性散射体归一化（低分子量，一般小于50kDa）；使用ASTRA 采集数据；处理光散射数据获取 Zimm Plot；评价 Zimm Plot；选择angle fit degree 和concentration fit degree。选择需删除的 concentrations与 detectors 尝试使用不同拟合模型（fit models），例如Debye、Zimm 、Berry。ASTRA 6 数据采集:打开 ASTRA 6（最新版）依次选择System Configuration Wizard。在溶剂对话框中选择 Solvent -water ； 在 Experiment Mode 中选择 Batch；点击 Next至 Select Instruments 对话框；选择 Light Scattering Instrument (例如 Heleos / Treos)；如果系统中配置 QELS选件，则 QELS 选择框默认值为已添加 ；点击 Next进入 Name Configuration对话框。 命名Configuration，例如LSU Zimm Plot。点击 Finish从而创建试验所需的Method。新的Method自动在ASTRA工作界面生成。下次测试样品时，直接打开ASTRA，依次点击 File New Experiment from Default。首次由 default Method创建的文件名为Experiment 1 。提示：所有的参数可在数据采集完毕后更改；但最好能在采集数据之前设定所需要的参数。 Configuration:点击 Configuration前面的“+”展开。双击 DAWN HELEOS (或 miniDAWN TREOS)。选择 Sample Cell 类型：Fused Silica（新仪器）； K5（老一代仪器）；或 Sample Cell to the Microcuvette或 Scintillation vial 。输入 Calibration Constant（该值可参考Certificate of Perfor