第二节基工程操作.ppt

一、基因工程的原理是什么? 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过____________和_________等技术，赋予生物以新的__________，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 作为载体的条件： 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 利用PCR技术扩增目的基因 三、人工合成 如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可 以通过DNA合成仪用化学方法之间合成！ 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 它们各自的作用是什么? 目的基因+启动子+终止子+标记基因 目的基因的 表达所需物质： 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 (二)基因表达载体的构建 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） —— 核心 同一种 (二)基因表达载体的构建 4.过程: (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍： （2）原理及适用范围 (三)将目的基因导入受体细胞 (三)将目的基因导入受体细胞 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 （2）方法： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原抗体杂交 巩固练习： 1、有关基因工程叙述正确的是（ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成是在细胞内完成的 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 2、下列关于酶的说法不正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA的切点不同 D、限制酶的作用主要是用来提取目的基因 3、下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体（ ） A、细菌质粒 B、噬菌体 C、动植物病毒 D、细菌核区的DNA D D A D * * * * * 体外DNA重组 转基因 遗传特性 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的概念 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车”─