2014免疫学进展1.ppt

1966年Claman和Triplett，1968年Mitchell和Miller，又分别证实了T细胞亚型的存在，其研究方法也是检测活化免疫细胞的基础。 20世纪70年代Coombs和Brain等建立了玫瑰花结试验，利用淋巴细胞表面抗原可与绵羊红细胞结合特性，用以检测T细胞数量。 1975年，Milstein C和K?hler G利用细胞融合技术，创建了由单一B细胞克隆产生抗体的方法，即单克隆抗体技术，二人也因此于1984年获得生理学医学诺贝奖。 流式细胞术 20世纪70年代诞生了现代免疫细胞检测技术中最具代表性的流式细胞术，该技术是利用现代计算机技术、激光技术、流体力学、免疫荧光技术于一体的特殊仪器进行细胞特性分析和分选的技术。 1973年BD公司与美国斯坦福大学合作，研制生产了第一台商用流式细胞仪FACS I，从此，流式细胞术进入了一个飞速发展的时代。 流式细胞仪已经成为细胞发育、分化、凋亡以及干细胞移植等研究的主要工具。 免疫学技术发展的现状 现代免疫学技术不仅仅应用于免疫学研究，已经广泛渗透到生命科学研究的每个领域。 一、传统技术的再发展 经典免疫学的检测敏感度较低，但也有其自身的优点，就是检测程序简便、快捷，便于临床诊断使用， 速率散射比浊免疫测定法、免疫乳胶浊度测定法及速率抑制免疫比浊法等。这些方法非常适合临床大样本自动化分析，已广泛用于临床补体、免疫球蛋白、循环IC以及C反应蛋白等的定量检测。 二、高敏感性、高特异性免疫技术的开发 建立在单克隆抗体基础上的双位点ELISA 电化学发光免疫分析( ECL) 电化学发光为电促发光，可产生稳定、高效的连续发光，而且检测方法简便，由于电化学发光易于操作、特异性强、灵敏度高、检出快速而且重复性好等优点，易于大样本检测，因而在临床应用广泛，如肿瘤标志物、C肽、生长激素、催乳素、促黄体生成素及绒毛膜促性腺激素等检测，具有非常好的发展前景。 三、复杂与简化的并存 流式细胞术（flow cytometry，FCM）是一项最具代表性的、先进的免疫学检测技术，?FCM综合了光学、电子学、流体力学、细胞化学、免疫学、激光和计算机等多门学科理论和技术，对液体流中的单个细胞或微粒进行多参数定性、定量分析以及分选。 免疫磁珠分选（Magnetic cell sorting）细胞具有高效、简便的特性，目前广泛应用于多种细胞， 流式细胞术检测巨噬细胞吞噬荧光微球结果 免疫学技术研发和应用的展望 一、单细胞免疫功能分析 最经典的单一免疫细胞功能实验，首推1963年尼尔斯·杰尼和阿尔伯特·诺丁建立的检测B细胞产生抗体能力的B细胞溶血空斑试验。 固相酶联免疫斑点技术（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）是从单细胞水平检测分泌抗体细胞(ASC) 或分泌细胞因子(CK) 细胞的一项细胞免疫学新技术。 活细胞成像（live cell imaging）技术，活细胞成像技术主要是借助显微镜系统直接观察活细胞在体外及体内生理、病理状态下的行为，通过采集图像与视频信号对各种细胞生理病理行为进行分析的方法。 ELISPOT检测结果 小鼠脑血管内的白细胞招募图像 （A）腹腔注射脂多糖4h后，小鼠脑血管内壁出现大量粘附和滚动的白细胞。（B）腹腔注射生理盐水4h后，小鼠脑血管中几乎观察不到粘附和滚动的白细胞。 小鼠活体成像 二、快速、简便的免疫技术研发 免疫学技术与医学联系最为密切，随着现代科学仪器设备的发展以及标记技术的进步，更敏感、特异、快速的诊断方法也在不断涌现，如速率散射比浊免疫测定法、胶体金快速诊断试纸等，可在数分钟内显示临床样本测定结果。 三、免疫疾病模型 由于人类供者以及伦理学的限制，很难找到合适的疾病模型自愿者，因此，疾病模型主要依赖动物模型。 自身免疫性疾病通常是多因素疾病，因此，免疫性疾病模型，多以模拟疾病形成原因的方式建立动物模型，在机制研究方面也常常借助于现代模式生物的基因敲除、敲入以及转基因动物模型。 Ⅰ型超敏反应疾病模型 Ⅰ型超敏反应（type Ⅰ hypersensitivity）又称速发型超敏反应（immediate hypersensitivity），过敏反应（anaphylaxis）。1921年Prausnitz将其好友Kustner对鱼过敏的血清注入自己前臂皮内，经过一段时间后再将鱼提取液注入同一部位，结果发现注射局部很快出现红晕和风团样反应，这就是著名的P-K试验，也是药物——皮肤过敏试验的基础。 1966年日本学者Ishizaka发现引起Ⅰ型超敏反应的主要抗体是血清中的IgE。研究显示实验动物用于致敏试验反应程度高低的顺序是：豚鼠﹥家兔﹥犬﹥小鼠猫蛙，常用豚鼠过敏试验作为Ⅰ型超敏反应动物模型。 胶原诱导关节炎动物模型