ECA-YLS2叶绿素荧光仪说明书.docVIP

荧光测量原理 调制叶绿素荧光 调制叶绿素荧光全称脉冲-振幅-调制（Pulse-Amplitude-Modulation,PAM）叶绿素荧光，我们国内一般简称调制叶绿素荧光调制叶绿素荧光仪的工作原理 植物吸收的光能只有3条去路：光合作用、叶绿素荧光和热。根据能量守恒：1＝光合作用＋叶绿素荧光＋热。可以得出：叶绿素荧光＝1－光合作用－热。也就是说，叶绿素荧光产量的下降（淬灭）有可能是由光合作用的增加或热耗散的增加引起的。由光合作用的引起的荧光淬灭称之为光化学淬灭（photochemical quenching, qP）；由热耗散引起的荧光淬灭称之为非光化学淬灭（non-photochemical quenching, qN或NPQ）。光化学淬灭反映了植物光合活性的高低；非光化学淬灭反映了植物耗散过剩光能为热的能力，也就是光保护能力。 用于激发荧光的测量光具有一定的调制频率，检测器只记录与测量光同频的荧光，因此调制荧光仪允许测量所有生理状态下的荧光，包括背景光很强时。正是由于调制技术的出现，才使得叶绿素荧光由传统的“黑匣子”（避免环境光）测量走向了野外环境光下测量，由生理学走向了生态学。 饱和脉冲法叶绿素荧光： 饱和脉冲（Saturation Pulse, SP）可被看作是光化光的一个特例。光化光越强，PS II释放的电子越多，PQ处累积的电子越多，光合电子传递被阻越多，荧光产量越高。当光化光达到使光合电子传递完全被阻（不能进行光合作用）的强度时，就称之为饱和脉冲。所谓饱和脉冲技术，就是打开一个持续时间很短（一般小于1 s）的强光关闭所有的电子门（光合作用被暂时抑制），从而使叶绿素荧光达到最大。 常用叶绿素荧光参数：经过充分暗适应后，所有电子传递链均处于开放态，打开测量光得到最小荧光Fo，此时给出一个饱和脉冲，所有的电子门就都将该用于光合作用的能量转化为了荧光和热，此时得到的叶绿素荧光为最大荧光Fm。根据Fm和Fo可以计算出PS II的最大量子产量Fv/Fm=(Fm-Fo)/Fm，它反映了植物的潜在最大光合能力。 在光照下光合作用进行时，只有部分电子传递链处于开放态。如果给出一个饱和脉冲，本来处于开放态的电子传递链将该用于光合作用的能量转化为了叶绿素荧光和热，此时得到的叶绿素荧光为Fm’。根据Fm’和F可以求出在当前的光照状态下PS II的实际量子产量Yield=ΦPSII=ΔF/Fm’=(Fm’-F)/Fm’，它反映了植物目前的实际光合效率。 光照状态下打开饱和脉冲时，电子门被完全关闭，光合作用被暂时抑制，也就是说光化学淬灭被全部抑制，但此时荧光值还是比Fm低，也就是说还存在荧光淬灭，这些剩余的荧光淬灭即为非光化学淬灭。淬灭系数的计算公式为：qP=(Fm-Ft)/(Fm-Fo)；qN=(Fm-Fm)/(Fm-Fo)；NPQ=(Fm-Fm’)/Fm’。 最初定义 qP和 qN时，认为只有可变荧光（Fm－Fo）会发生荧光淬灭，最小荧光 Fo 不发生淬灭。但是，后来认为当 qN超过 0.4 时也会有明显的 Fo 淬灭。要正确计算 qP和 qN，就必须考虑 Fo 淬灭。此时qP=(Fm-Ft)/(Fm-Fo’)；qN=(Fm-Fm)/(Fm-Fo’)； 当F达到稳态后关闭光化光，同时打开远红光（Far-red Light, FL）（约持续3－5 s），促进PS I迅速吸收累积在电子传递链中的电子，使电子传递链在很短的时间内回到开放态，F回到最小荧光Fo附近，此时得到的荧光为Fo’。由于在野外测量Fo’不方便，因此野外版的调制荧光仪（除PAM-2100和WATER-PAM外）多数不配置远红光。此时可以直接利用Fo代替Fo’来计算qP和qN，尽管得到的参数值有轻微差异，但qP和qN的变化趋势与利用Fo’计算时是一致的。由于NPQ的计算不需Fo’，近年来应用越来越广泛的。 根据PS II的实际量子产量ΔF/Fm’和光合有效辐射（Photosynthetically Active Radiation, PAR）还可计算出光合电子传递的相对速率rETR＝Yield × PAR × 0.5 × 0.84。单位是 μmol 电子?m-2?s-1。上式满足如下假设： - Yield 代表全部光合量子产量 - PAR 代表入射到样品的光合有效辐射强度，单位为μmol?m-2?s-1 - 传递一个电子需要吸收两个光子，因为光合电子传递需要两个光系统的参与（系数 0.5） - 入射光强有 84％被叶片吸收（系数 0.84） 实际上，最后一个假设并不是永远都正确。尽管报道表明许多种植物叶子的吸光系数接近 0.84，但吸光系数还受许多其它因素的影响，如叶片的反射系数、叶绿素浓度和入射光的光谱组成等。在计算 ETR 时应考虑到这些因素的影响。