实验5 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血红蛋白-20151102.pptVIP

6. 样品的处理及加样 作为分析用的加样量仅需几微克 取100 uL样品，用样品溶解液稀释至1 mL（已制备好） 样品溶解液：40%蔗糖或20%甘油，0.02%溴酚蓝，0.01M pH6.7 Tris-HCl 缓冲液 用微量进样器取20 ?L上述混合液，通过缓冲液，小心地将样品加到凝胶凹形样品槽底部。注射器不可过低，以防刺破胶体，也不可过高, 在样下沉时会发生扩散。 每小组作3个样品： 纯化后的血红蛋白 BSA 蛋白Marker 5个小组用两个电泳板 7 .电泳 将电泳仪的正极与下槽连接，负极与上槽连接。（红连红，黑连黑） 打开电泳仪开关，将电压调至最大，调整开始时电流为15 - 20 mA，待样品进入分离胶后，将电流调至30 - 40 mA， 当溴酚蓝染料距硅胶框1cm时，停止电泳，关闭电源。 Buffer + - 浓缩胶 分离胶 溴酚蓝 2个电泳板用一个电泳槽 * 8.染色与脱色 电泳结束后，取下凝胶模，卸下硅胶框，用塑料铲撬开短玻璃板， 从凝胶板上切下一角作为加样标记。 加入染色液，置于40oC烘箱染色20min（凝胶上应有隐约的蓝色带）。染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次，再加入脱色液，置于40oC烘箱脱色0.5-1h（直至蛋白质区带清晰），即可观察结果及计算相对迁移率。 9. 结果处理 观察记录电泳结果 量出加样端距溴酚兰的距离(cm)