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0040沙門氏菌生化试验检验操作规程
贵州明湖药业股份有限公司 GMP文件
文件名称 沙门氏菌生化检验操作规程 文件类别 技 术 标 准 制订部门 质量保证部 起 草 人 于艳 日 期 2003年11月9日 原 编 号 MH/ZB-SOP-2003-084 修 订 人 日 期 修订后编号 SOP-QUD-0040-2006 审 核 人 日 期 页 数 共4页 批 准 人 日 期 实施日期 2006年6月1日 颁发部门 贵州明湖药业股份有限公司 分发部门 质量保证部
目 的 建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。
依 据 《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。
范 围 本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。
责任人 QC负责人、化验员。
内 容
1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。
1.1仪器：
托盘天平
1.2玻璃器皿：
150ml锥开瓶、试管、载玻片
1.3试液：
1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。
1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。
1.4染色剂：
1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。
1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。
1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。
1.5培养基：
1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。
1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。
1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。
1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。
1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。
麦康凯琼脂培养基：取麦康凯琼脂试药55g，加蒸馏水1000ml加热使溶解，116℃灭菌30分钟，备用。
1.5.6三糖铁琼脂培养基斜面：取三糖铁琼脂试药6.4g，加蒸馏水100ml，分装小试管，121℃灭菌20分钟，倾斜摆放，凝固后备用。
脲琼脂培养基：取脲琼脂试药2.9g加蒸馏水100ml，加热使溶解，121℃灭菌20分钟，备用。
1.5.7氰化钾培养基：取氰化钾培养基试药两份，每份1.4g，分别加蒸馏水100ml，加热使溶解，121℃灭菌20分钟，冷却后，一份加氰化钾试液1.5ml，另一份不加氰化钾试液，分别分装于12mm×100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡胶塞塞紧，置冰箱4℃备用。
1.5.8赖氨酸脱羧酶培养基：取赖氨酸脱羧酶培养基试药两份，每份0.9g，分别加蒸馏水100ml加热溶解后；一份加L—赖氨酸0.1g，另一份不加作为对照，分别按每管2.5ml分装小试管，并滴加一层液体石蜡，121℃灭菌20分钟备用。
2操作步骤：
2.1增菌、分离培养：
2.1.1取供试品10g，加灭菌生理盐水100ml作供试品溶液，取营养肉汤增菌液3份，每份100ml，2份分别加入10ml供试品溶液，其中1份加入对照菌溶液作阳性对照，第3份加入10ml灭菌生理盐水作阴性对照。置36±1℃培养18—24小时，阴性对照应无菌落生长。取其余2份培养物各1ml，分别接种于四硫磺酸盐增菌培养基10ml中，再置36±1℃培养18—24小时。分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上，置36±1℃培养18—24小时或延至40—48小时。当阳性对照的平板呈现阳性菌落时，供试品的平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于沙门氏菌菌落形态特征表时，可判为未检出沙门氏菌。
2.1.2如供试品平板有菌落生长，或与沙门氏菌菌落形态特征表相符或疑似者，应挑选2—3个菌落分别接种于三糖铁琼脂培养基斜面
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