α淀粉酶檢测操作规程.docVIP

α-淀粉酶活力检测操作规程 1 酶活定义 1g固体酶粉（或1mL液体酶），于60℃、pH=6.0条件下，1h液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。 2 原理 在一定温度和PH值条件下，α-淀粉酶将淀粉分子链中的α-1，4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活力有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。 3 仪器和设备 3.1 分析天平：感量0.0001g 3.2 精密pH计：精确至0.01 3.3 分光光度计：应符合GB9721有关规定 3.4 电热恒温水浴锅：30～100℃，±0.2℃ 3.5 计时器：每小时误差不超过5秒 4 试剂与溶液 4.1 原碘液：称取碘（I2）11g、碘化钾（KI）22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，贮于棕色瓶中。 4.2 稀碘液：吸取原碘液2.00ml，加碘化钾20g，用水溶解并定容至500mL，贮于棕色瓶中。 4.3 20g/L可溶性淀粉溶液： 称取可溶性淀粉2.000g，精确至0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70mL沸水中，然后，以30ml水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100mL。此溶液需要当天配置。 4.4 磷酸缓冲液（pH=6.0）