5第5章核酸解释.ppt

讲到此处。 （二）复性 复性：变性DNA在适当条件下，两条分开的链彼此重新缔合成为双螺旋结构。 将热变性的DNA 骤然冷却时，DNA不可能复性、所以用同位素标记的双链DNA片段作为杂交的探针时，在沸水浴中加热数分钟后，要骤然在冰浴中冷却至低温，以防止复性。变性DNA在缓慢冷却时，可以复性，此过程称为退火（annealing），DNA的片段越大，复性越慢。DNA的浓度越大，复性越快。在一定条件下，复性反应的速度可以Cot1／2来衡量。Co为变性DNA复性时的初始浓度，以核苷酸的摩尔浓度表示／为时间，以秒表示，Cot1/2表示复性一半的Cot值。 复性的条件： 1、温度缓慢降低，骤冷不得恢复。 2、较短的片段恢复较快，反之较慢。 3、均一性比异质性好恢复。 4、浓度越大恢复越快。 （三）核酸的杂交 将不同来源的DNA放在试管里，经热变性后，慢慢冷却，让其复性。若这些异源DNA之间在某些区域有相同的序列，则复性时，会形成杂交DNA分子。DNA与互补的RNA之间也可以发生杂交。 分子杂交实验基本步骤 1、将DNA样品经限制性内切酶降解后，用琼脂糖凝胶电泳进行分离。 2、将胶浸泡在碱（NaOH）溶液中使DNA进行变性； 3、然后将变性DNA转移到硝酸纤维素膜上（硝酸纤维素膜只吸附变性DNA）， 4、在80℃焙烤4～6 h，使DNA牢固地吸附在硝酸纤维素膜上。 5、与放射性