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综合性实验报告 质粒的提取及酶切
本科学生综合性实验报告
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姓名 李艳 学号 1443204000124
学院 生命科学学院 专业、班级 14级生物科学B班
实验课程名称 分子生物学实验
教师及职称 吴暇玉（讲师）
开课学期 2016 至 2017 学年 上 学期
云南师范大学教务处编印
实 验 室 睿智楼3幢422 实 验 时 间 2016年9、10月 实 验 名 称 质粒DNA的提取及酶切、琼脂糖凝胶电泳 一、实验目的
After the experiment is finished, students should be able to isolate plasmid DNA by the alkaline-detergent method.
After the experiment is finished, students should know how to make an agarose gel.
掌握碱去垢剂法提取质粒DNA的方法。
掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。 二、实验仪器及试剂
Ⅰ. Instruments
1. Constant temperature incubator（恒温培养箱）
2. Constant temperature shaking table （恒温摇床）
3. High speed centrifuge （高速离心机）
4. Vortex mixer（涡旋振荡器）
5. Clean Benches（超净工作台）
6. Autoclave （高压灭菌锅）
7. Pipettes （微量加样器）
Ⅱ. Reagents
1. Solution Ⅰ（溶液Ⅰ ）
( 25mM Tris-HCl pH8.0, 50mM glucose, 10mM EDTA )
(25mM Tris·HCl（pH8.0）, 50mM 葡萄糖, 10mM EDTA)
2. Solution Ⅱ （溶液Ⅱ ）
( 0.4M NaOH, 2.0% SDS, made fresh just prior to use )
(0.4M NaOH,2% SDS [新鲜配制,等体积混和])
3. Solution Ⅲ （溶液Ⅲ ）
( 5 M potassium acetate , acetic acid ) stored on ice .
(5M KAC:60ml,冰醋酸:11.5ml,水:28.5ml)
4. TE buffer containing 10μg/ml RNase A ( preheated to 80℃ for 10 min inactivate DNase )
5. 70% ethanol（乙醇）.
6. Phenol : chloroform [平衡酚 : 氯仿]( 1 : 1 )
7. LB培养基：
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10g
pH 7.0
摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/L氢氧化钠（约0.2ml）调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1000ml，在1.034×105Pa高压蒸汽灭菌20min。
8.菌种：含质粒的大肠杆菌
Ⅲ
1. Agarose.
2. TBE [5 × stock solution (1 liter): 54 g Tris base, 27.5 g boric acid, 20ml 0.5 M EDTA, pH 8.0].
3. 10 × loading buffer: 0.25% bromophenol blue, 40% sucrose in water.
4. Equipment: beaker, graduated cylinder, stir bar, microwave, Pan balance, comb, electrophoresis tank, and Electro-phoresis System , Ultraviolet transilluminator.
5. Gelview 三、实验原理
Plasmids are small circular DNA molecules which replicate independently of the host genome and encode antibiotic resistance. They are
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