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Western Bloting (张雪雁) 操作步骤： 做胶：下层胶7.5ml一块，以水或乙醇隔离空气。待下层胶凝固后做上层胶，每块胶配置3ml，灌胶、插梳子，赶走气泡。 蛋白变性：在胶凝固过程中，变性蛋白质，蛋白质的上样量按事先所测弄浓度计算准确，分装到EP管或，按5ul/100ul样品的浓度加β—巯基乙醇，然后以PCR仪95℃变性10分钟。 上样、电泳： 上层胶为安全凝固（大约15分钟）后，两只手同时向上用力取下梳子。以蒸馏水仔细清洗各泳道内残留得碎胶。 将SDS—PAGE胶转移到电泳槽中，如果只做一块胶，对面以玻璃板平衡。1х电泳缓冲液充满电泳槽后，以玻璃棒将电泳槽中的气泡尽量赶除。 先以少量加有溴酚蓝1х上样缓冲液标记各泳道。 变性过的各管蛋白质样品以加有溴酚蓝1х上样缓冲液补齐至50ul。蛋白Marker也补齐至50ul。 以一定顺序将蛋白样品和Marker，用微量移液器加至泳道。上样过程中，手要稳，避免将泳道划破，样品自枪头打出时要缓慢，以免样品自泳道飘出。剩余未加样的泳道以50ul上样缓冲液平衡。 加样完毕，红对红，黑对黑将电泳槽和电泳仪接好，打开电源，电压调至60-100V之间。一般来说样品在上层胶时电压可稍高，进入下层胶后较低的电压容易将个分子量蛋白粉理清楚。溴酚蓝自胶内跑出后电泳结束。 电转： 准备PVDF膜及滤纸。PVDF大小8.2х5～5.5，滤纸按