复旦大学分析化学AII第四章分子发光光谱.ppt

期中考试说明 *地点: 第四教学楼4401 *时间: 5月5日, 上午7:30—9:30; *请带好学生证或一卡通; 考题形式 选择题, 10题, 共20分; 填空题, 20空格, 共20分; 名词解释, 5题, 共20分; 问答题, 4题, 共20分; 计算题, 4题, 共20分; 一、荧光与磷光的产生过程 luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 2.电子激发态的多重度 2.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 二、激发光谱与荧光(磷光)光谱 excitation spectrum and fluore-scence spectrum 2.荧光(或磷光)的发射光谱 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 三、荧光的产生与分子结构的关系Relation between fluorescence and molecular structure 2.化合物的结构与荧光 溶剂的影响 四、影响荧光强度的因素 一、仪器结构流程 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 三维光谱图的仪器 磷光检测 二、荧光定量方法 1.同步扫描技术 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差(??)和固定能量差及可变波长三种； 3.荧光分析法的应用 三、磷光分析法的应用 2.室温磷光 由于低温磷光需要低温实验装置，溶剂选择的限制等因素，从而发展了多种室温磷光法（RTP）。 （1）固体基质室温磷光法（SS-RTP） 此法基于测量室温下吸附于固体基质上的有机化合物所发射的磷光。所用的载体种类较多，有纤维素载体（如滤纸、玻璃纤维）、无机载体（如硅胶、氧化铝）以及有机载体（如乙酸钠、聚合物、纤维素膜）等。理想的载体是既能将分析物质牢固地束缚在表面或基质中以增加其刚性，并能减小三重态的碰撞猝灭等非辐射去活化过程，而本身又不产生磷光背景。 一、基本原理 principle 二、特点 characteristics 紫外-可见分光光度计: 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 荧光(磷光)分光光度计: 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 荧光分光光度计 样品池 I0 It I0 It IF,p 样品池：液池、荧光池 1.样品池的材料：与紫外-可见分光光度计的吸收池一样 2. 吸收池的形状：紫外-可见分光光度计的吸收池两面透光 荧光分光光度计的样品池四面透光 波长范围 3. 使用注意事项 容易破碎 问题：紫外-可见分光光度计的吸收池与荧光分光光度计的样品池有什么区别？ 沾污问题 若采用多色光照射，用正交多色散器、二维多道检测器，如CCD面阵检测器，并用计算机数据采集和运算，可得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧(磷)光光谱图。 2. 三维荧光光谱 I F ∝f (λex 、λem) 蒽的激发光谱 固定发射波长、扫描激发波长 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。在有荧光发射的同时测量磷光。 测量方法： （1）通常借助于荧光和磷光寿命的差别，采用磷光镜的装置将荧光隔开。 （2）采用脉冲光源和可控检测及时间分辨技术。 室温测量时，不需要杜瓦瓶。 1. 定量依据 2. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ 检测下限：0.1～0.1?g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液的 量子产率φs=0.55。 （2）选择性强 既可依据特征吸收光谱，又可根据特征发射光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。 同步扫描技术可简化光谱，谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率； 如图。 合适的??可减少光谱重叠； 酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但??15nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 三、荧光分析方法 ??的选择非常重要，它直接影响同步荧光光谱的形状、带宽和信号强度。??选择通常需多次试验后才能确认。 2.时间分辨荧光光谱 是建立在荧光强度与时间变化关系上的方法。 短脉冲光激发荧光体，激发群体随时间而衰变，其衰变率： Io与荧光物质的量 成正比。 时间分辨检测下限可达飞秒（10-15） 可消除干扰。 1、