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兰 州 理 工 大 学 生物专业综合实验2实验指导书 （植物组织培养部分） （四年制生物工程专业） 巩慧玲 编写 生命科学与工程学院 二零一二年十月 目 录 实验一 培养基母液的配制 3 实验二 培养基的配制与灭菌 6 实验三 植物愈伤组织的诱导 8 实验四 植物组培材料的继代培养 10 实验五 植物悬浮细胞系的建立 11 实验一 培养基母液的配制 一、 通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。 二、 配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩20倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩200倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩200倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩200倍）等。 三、 冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(100ml，500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉 NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，KI, Na2?EDTA?2H2O， FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇，2，4-D，NAA，6-BA，次氯酸钠，乙醇 四、 1．MS大量元素母液的配制 配制时先用量筒量取蒸馏水大约350ml，放入500ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2．MS微量元素母液的配制 按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4 ?4H2O， ZnSO4?7H2O ，H2BO3 ，KI ，NaMoO4?2H2O， CuSO4?5H2O， CoCl2?6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3．MS铁盐母液配制 把FeSO4?7H2O和 Na2?EDTA?2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2?EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5，加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4． MS有机化合物母液的配制 按配方表中用量依次称取：肌醇，维生素B1，烟酸，甘氨酸，维生素B6，用蒸馏水依次溶解并定容后，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 5．植物生长物质母液的配制 2，4-D母液：准确称量10mg2,4-D，先用少量1mol/LNaOH溶液完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，即配成浓度为0.1mg/ml的2,4-D母液。转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 NAA母液：配制浓度为0.2mg/ml。NAA仍属于生长素类激素，配制方法与2,4-D相似。 6-BA母液：配置浓度0.5 mg/ml，用少量（几滴）1M HCl或酒精溶解后再定容。 6．消毒剂的配制 乙醇：70-75% 次氯酸钠：1-2% 五、实验报告 1．撰写实验报告。（包括实验名称、目的、原理、实验用品、实验操作内容，实验结果，数据记录与处理、分析和讨论） 2．思考题（必做） 根据下列表中各母液或药品的浓度，试计算配制不同体积的（MS+1mg/L2，4-D+0.5mg/L6-BA+糖+琼脂）培养基所需吸取的母液或所称取的药品量，并将结果填入表中（见下页），（单位：ml）。 药品名称 MS配方需要量（g/L） 母液浓度 /扩大倍数 配制1000ml 配制500ml 配制200ml 大量元素