分子生物学-6概述.ppt

用于沉淀核酸的盐溶液 电泳 (electrophoresis) 带电荷物质在电场中移 动的现象叫电泳。 DNA 或 RNA 分子带负电荷，在电场作用下，DNA 或 RNA 分子由负极向正极移动。 DNA 或 RNA 分子量越大，迁移速率越慢，反之，分子量越小，迁移速率快。 不同构象的 DNA 或 RNA 分子，迁移速率不同。 一、核酸电泳原理 用琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定和纯化 DNA 分子。 用变性琼脂糖凝胶电泳分离和鉴定 RNA 分子。 用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 DNA 测序反应中合成的系列单链 DNA 片段 (5-500 bp)。 用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离不同构象的单链 DNA 分子。 二、核酸电泳类型 电泳仪 水平电泳装置 迁移方向 样品槽 电泳缓冲液 琼脂糖凝胶 - + 琼脂糖 (agarose) 是 D- 和 L-半乳糖残基通过 ?-(1?3) 和 ?-(1?4) 糖苷键交替构成的线状聚合物，琼脂糖凝胶可形成孔径为 50 nm 到 200 nm 的分子筛。 琼脂糖凝胶的分辨率较低，但分离范围较大。 (一) DNA 琼脂糖凝胶电泳 1. 琼脂糖凝胶浓度与 DNA 分离效果 琼脂糖凝胶浓度 (%) 线状 DNA 分子的有效分离范围 (kb) 0.5 30 → 1.0 0.7 12 → 0.8 1.0 10 → 0.5