westen blot试验操作指南.docVIP

蛋白表达研究系列之——Western Blot试验操作指南 目 录 目录 1 一、总蛋白的提取 2 1 试验类型和蛋白类型 2 2 样品组织类型 3 3 蛋白表达峰度判断 4 4 总蛋白提取的基本步骤 4 4.1细胞样品总蛋白的提取操作步骤 5 4.2组织样品总蛋白的提取操作步骤 5 二、总蛋白BCA定量 6 三、SDS凝胶电泳 7 四、转膜 8 五、信号增强剂处理膜 9 六、封闭、一抗孵育、二抗孵育 9 1 封闭 9 2 一抗孵育 9 3 二抗孵育 13 七、曝光显色 14 八、灰度分析 15 九、抗体及相关溶液配制 15 1 抗体 17 2 相关溶液配制表 17 蛋白检测相对于DNA/RNA的检测来讲要困难许多，Western Blot作为蛋白检测的经典方法短时间内仍然无法被取代。Western Blot的原理并不复杂，网上有很多这方面的材料，这里不作过多的介绍。虽然原理、操作并不复杂，但做好Western Blot、得到满意的图片并非易事。其操作过程中涉及到：蛋白提取、电泳、转膜、杂交、显色、抗体的选择、试剂的选择、设备应用等诸多内容，其中每一个环节的差错对最后的试验结果都会产生不小的影响，最终导致试验失败。很多同学都在抱怨自己的Western Blot没有信号、目的条带太弱、杂带太多、条带弯曲、泳道中有涂抹状背景等诸多问题，大部分情况都会最终把矛头指向抗