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第七章 微生物的遗传变异和育种 Microbial Genetics and Variation 有 关 概 念 第 一 节 遗传的物质基础 Matter Base for Genetics 一、三个经典实验 （一）经典转化实验 （二）噬菌体感染实验 （三）植物病毒的重建实验 （二）原核生物的质粒 1、质粒的定义及特点 质粒：凡游离于原核生物核基因组以外,，具有复制能力的小型共价闭合环状的dsDNA分子，即cccDNA称~。 质粒的三种构型 CCC型（covalently closed circular): 共价闭合环状 OC型（open circular form):开环型 L型（linear form)：线型 1、致育因子 又称F因子，其大小约100kb，与E.coli有性生殖有关。 F+菌株：携带有F质粒的菌株称~（相当于雄性）； F-菌株：无F质粒的菌株称~（相当于雌性）； 高频重组菌株（Hfr)：F质粒整合到宿主细胞染色体上的菌株称~。 F’ :携带不同基因的F因子统称为~ 2、抗性因子 包括抗药性和抗重金属二大类，简称R质粒。 如R1质粒可使宿主对氯霉素、链霉素、磺胺、氨苄青霉素、卡那霉素产生抗性。 3、Col质粒又称大肠杆素质粒 首先发现于大肠杆菌，该质粒含有编码大肠菌素的基因，大肠菌素是一种细菌蛋白，只杀死近缘且不含Col质粒的菌株，而宿主不受其产生的细菌素的影响。 4、毒性质粒 许多致病菌的致病性是由其所携带的质粒引起的，这些质粒具有编码毒素的基因。 如Bt (苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis）产生的毒素伴孢晶体即由位于质粒上的基因所编码。 5、代谢质粒：此类质粒上携带有能降解某些基质的酶的基因。这类质粒也称为降解质粒，每种具体的质粒常以其降解的底物而命名。在有毒化合物的降解方面有重要意义。 6、隐秘质粒：不显示任何表型效应，它们的存在只有通过物理的方法才能检测发现。 （二）根据质粒的拷贝数、宿主范围 高拷贝数质粒(松弛型质粒)： 10~100拷贝数； 低拷贝数质粒(严谨型质粒)： 1~4个拷贝数。 附加体：能整合进染色体而随染色体的复制而进行复制的质粒称~ （三）质粒作为载体的优点 1、体积小，便于DNA的分离与操作 2、呈环状，使其在化学分离过程中能保持性能稳定。 3、有不受核基因组控制的独立复制起始点。 4、拷贝数多，使外源DNA可很快扩增。 5、存在抗药性基因等选择性标记。 （四）质粒的分离与鉴定 分离一般包括细胞的裂解、蛋白质和RNA的去除以及设法使质粒DNA与染色体DNA相分离等步骤。 用琼脂糖或聚丙酰胺凝胶电泳鉴定 质粒载体的制备 第 二 节 基因突变和诱变育种 一、基因突变（gene mutation) 泛指细胞内（或病毒粒内）遗传物质的分子结构或数量突然发生的可遗传的变化，可自发或诱导产生。 狭义：点突变 广义：基因突变和染色体畸变 （1）营养缺陷型：某一野生菌株因发生基因突变而丧失合成一种或几种生长因子、碱基或氨基酸的能力，因而无法再在基本培养基上正常生长繁殖的变异类型，称为营养缺陷型。 （2）抗性突变型：指野生型菌株因发生基因突变，而产生的对某化学药物或致死物理因子的抗性变异类型。 （3）条件致死突变型 某菌株或病毒经基因突变后，在某种条件下可正常地生长、繁殖并呈现其固有的表型，而在另一条件下却无法生长、繁殖，这种突变类型称为~ 突变类型 （4） 形态突变型 指由突变引起的个体或菌落形态的变异，一般属非选择性突变。 （5）抗原突变型：指由于基因突变引起的细胞抗原结构发生的变异类型，包括细胞壁缺陷变异、荚膜或鞭毛成分变异等。 （6）产量突变型：通过基因突变而产生的在代谢产物产量上明显有别于原始菌株的突变株，称产量突变型（正、负变株）。 1、自发性：突变可以在没有人为的诱变因素处理下自发地产生。 2、不对应性：突变的性状与引起突变的原因间无直接的对应关系。 3、稀有性 ：通常自发突变的几率一般在10-6～10-9 4、独立性：某一基因的突变，既不提高也不降低其他基因的突变率。 5、可诱变性：通过诱变剂可以提高突变的机率。提高10～105倍 6、稳定性 ：突变的根源是遗传物质结构上发生了稳定的变化，所以产生的新的变异性状是稳定的，可遗传的。 7、可逆性：由原始的野生型基因变异为突变型基因的过程，称为正向突变，相反的过程则称为回复突变，任何性状都可发生正向突变，也都可以发生回复突变。 （四）基因突变自发性和