食物过敏原白的定量检测方法—科标检测.docVIP

食物过敏原蛋白的定量检测方法 现在食物过敏现象越来越引起人们的重视，在西方发达国家，1%～2% 的成人与5%～8% 的儿童都存在食物过敏现象，其中儿童主要以牛奶和鸡蛋过敏为主，而成人主要以海鲜贝壳类食物过敏为主。有明显迹象表明，食物过敏现象在近几年有严重的趋势。在世界卫生组织报告的威胁人类健康的因素中，食物过敏排在第 4位，并且现在仍然没有彻底有效的治疗食物过敏的方法。在食品加工工业中，原料里几乎不可避免的含有各种致敏蛋白，例如鸡蛋、牛奶、花生等，食物过敏患者想完全避免接触致敏物非常困难。 为确保食品标签的准确性和消费者的安全，可靠、定量的过敏原蛋白检测方法是非常必要的。因为食物过敏原在食品中的含量较少并可能包裹于食品基质中，所以食物过敏原的检测十分困难。极少量的过敏原蛋白即可引起严重的过敏反应，这对食物过敏原蛋白定量检测的灵敏度和准确性提出了更高的要求。 青岛科标检测研究院——生物实验室，拥有丰富的食品过敏原检测经验，可检测原材料食品和加工食品中的过敏源蛋白质，为食品生产商减少安全风险，保障食品安全、维护消 费者健康。 本文分别对基于单个蛋白(如ELISA法)和定量蛋白质组学的食物过敏原定量检测方法进行综述，单个蛋白检测技术的发展已经较为成熟，但尚不足以满足实际需要，而蛋白质组学方法的运用，为实现对多种食品过敏原同时进行高通量、高灵敏度的快速检测提供了新的手段。 1、基于单个蛋白的食物过敏原定量检测 基于单个蛋白的食物过敏原定量检测方法主要为免疫学方法，除传统免疫学方法外，生物传感器也被应用于检测当中。目前主要的过敏原定量检测方法主要包括如下几类： 1.1 酶联免疫吸附实验(ELISA法) 随着全自动酶标分析仪的普及，ELISA法在上世纪90 年代末期发展迅速，其特异性和灵敏度也有了很大的提高，大大扩展了其在食品检测领域中的应用。ELISA法是一种免疫测定技术，基础是抗原或抗体的固相化及酶标记。在最常用的双抗体夹心ELISA法中，首先将抗体结合在固相载体表面，使其与样品蛋白反应，然后加入酶标记的二抗来检测已结合于固相载体表面的样品蛋白。结合于固相载体表面的样品蛋白越多，酶标记二抗的显色反应就越强，由此进行样品蛋白的定量分析。 目前，在食物过敏原的各种检测方法中，ELISA法是使用范围最广的检测方法，多采用双抗体夹心法，具有特异性高、敏感性强、快速方便、设备投资小等优点，可以实现比较精确的定量检测。根据报道，使用双抗体夹心ELISA法检测牛奶过敏原蛋白的最低检出限可达 25μg/L。此外，还有用此法对大豆和花生过敏原蛋白进行检测的相关报道，也能达到相当的检测水平。正因为 ELISA 法的诸多优点，已经实施过敏原法规标准的欧盟、美国、加拿大和日本等国家均推荐ELISA 法为过敏原检测方法，而且现在商业食物过敏原检测试剂盒绝大多数也都是基于ELISA技术，在西方发达国家其应用已经比较普及。 为了进一步提高ELISA法的灵敏度与准确度，近年新兴了一种将ELISA与电感耦合等离子质谱(ICP-MS)相结合的方法，即ELISA-ICP-MS 法，在此方法中，用稳定同位素取代酶对二抗进行标记，然后可通过质谱进行定量分析。根据报道，用此法可以在 1g 的谷类食品混合物中检测出2μg 的花生过敏原。 1.2 RAST/EAST及RAST/EAST抑制实验 自从IgE 成功纯化及抗IgE 抗体成功制备后，放射过敏原吸附实验(RAST)与酶标记过敏原吸附实验(EAST)检测技术就建立起来，其基本原理都是在固相载体上使特异性IgE 抗体与食物过敏原结合，然后进行检测，现在已是一种标准化的食物过敏原检测方法，使用广泛。 在此基础上又建立了放射过敏原吸附抑制实验(RAST抑制实验)和酶标记过敏原吸附抑制实验(EAST抑制实验)，可对食物过敏原进行定量测定，其在食物过敏原检测中获得了广泛的应用。RAST/EAST 抑制实验的优点是可以实现全自动操作，避免了人为操作带来的误差；缺点是对人血清的依赖，人血清的个体差异性限制了这两种方法在食物过敏原定量检测中的应用。 1.3 火箭电泳(RIE)法 RIE 法是将含有已知抗体的琼脂制成琼脂板，冷凝后，在液板上的阴极端挖一排小孔，孔中分别加入一定量的待检样品及不同稀释度的标准抗原，进行电泳。抗原向阳极移动，并与抗体结合。在抗原、抗体比例适当的部位形成锥形沉淀峰，其形状如火箭，该峰的高度与抗原量成正比，可快速测出标本中过敏原的含量。 据报道用此方法检测了不同食品中鸡蛋、牛奶和花生蛋白的含量。RIE 的优点是检测速度快，缺点是制胶操作和染色过程比较繁琐。 1.4 组胺释放实验 致敏靶细胞被食品过敏原蛋白激发后会释放出组胺，然后用放射免疫法、荧光测定法检测组胺含量，再与合适参照进行比较，就可以