医学生物化基本实验.docVIP

医学生物化学基本实验 第一节 蛋白定量分析实验 蛋白质是一切活细胞和有机体的最重要组成成分，它是构成人体及所有动物机体组织的主要部分。蛋白质是由二十种氨基酸以肽键相互连接而成的复杂的高分子化合物。蛋白质含量可通过它们的物理化学性质，如折射率﹑比重﹑紫外吸收﹑染色等测定而得知，或用化学方法，如微量凯氏定氮﹑folin-酚试剂、双缩脲反应等方法来测定，表2-1为五种蛋白质的测定方法的比较。 表 五种蛋白质测定方法比较 方 法 灵敏度 原 理 干扰物质 凯氏定氮法 (Kjedahl法) 0.2～1.0mg 将蛋白质转化为氮，用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） 双缩脲法 (Biuret法) 1～20mg 多肽键加碱性铜离子生成紫色络合物 硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸 Folin-酚试剂法 (Lowry法) 5μg 磷钼酸-磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇 考马斯亮蓝法 (Bradford法) 1～5μg 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时其λmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；TritonX-100； SDS 紫外吸收法 50～100μg 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌呤和嘧啶；各种核苷酸 实验一 双缩脲法测定蛋白质含量 【实验目的】 掌握双缩脲法测