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精确的机械感应装置在基底硬度对细胞牵引力影响的研究 Léa Trichet, Jimmy Le Digabel, Rhoda J. Hawkins, Sri Ram Krishna Vedula , Mukund Gupta, Claire Ribrault,Pascal Hersen, Rapha?l Voituriez, and Beno?t Ladoux 细胞迁移在许多基本的生物学的研究中，如细胞生长形态、肿瘤转移和伤口愈合等，都有很重要的作用。细胞在生长时与基底产生的牵引力与基底硬度有直接的关系。最常用的理论是，细胞主要在力传导的地方对基底产生牵引力，称为粘着斑，它的大小至少在初始阶段和细胞基底有一定的关系。事实上，我们的实验数据直接表明了在硬度大的基底上会更快的产生牵引力，基底硬度决定了粘着斑上力的测量结果。在基于主动凝胶理论的唯象模型的基础上，从精确的机械感应机制得出对基底硬度感应的是细胞的骨架而不是细胞本身。精确的机械感应，可以得出在硬度梯度上细胞自适应的迁移。在又硬度梯度的交界线上，我们实验观察到细胞不仅优先迁移到较硬的基底上，而且在窄幅的硬度变化上更明显。综上，这些发现为我们提供了独特的见解来研究细胞对外界刺激的影响和以细胞骨架为基础的硬度感应机制。 关键词：肌动蛋白细胞骨架，微制造，生物力学，细胞力学 细胞迁移不仅与细胞培养环境中的化学物质有关，还有其机械性能，细胞通过拉动基底直接感应基底的物理特性及其环境。大量资料表明弹性阵列在调节细胞功能有关键性的作用，例如影响细胞粘附性、迁移和分化。这是通过细胞与基底产生肌动球蛋白的力量来感应基底硬度。细胞粘附的机械敏感性质决定了细胞外基质（ECM）影响机械性能的灵敏度。通过粘着斑（FAs）的测量来测量受到的牵引力。文献中报道，FAs的面积和它的动力有一定的相关性。机械敏感性是通过受力后来诱发FAs的触发，研究其中的关系，也可以反过来分析。但是对于细胞的机械敏感性如何感应它的基底硬度换（还）不清楚。在许多研究中也出现了很多相互矛盾的结论。此外，最经典的模型建立和间接观测，表明可以用该收缩肌动球蛋白装置作为一个基底硬度传感器。但是从物理的角度来看，周围的基质对响应细胞收缩的变形了解甚少。细胞机械敏感性的合理机制，可以通过细胞外基质施加应力或应变。力的传导的影响机制也许可以解释细胞在不同基底硬度对细胞粘着、迁移和分化的差异。 结果与讨论 在不同的基底硬度下，粘着斑和牵引力测量的动态变化。 我们通过函数关系，明确的得出这种基底粘着斑核形成和其硬度的关系。本文使用的仪器是微作用力传感器阵列（FSA）和REF52成纤维细胞的荧光显微镜表达荧光标记的FA蛋白（YFP-桩蛋白）（图1 A和B）。接种REF52细胞稳定表达YFP-桩蛋白在μFSA包括各种直径和高度的纤连蛋白涂覆的微柱。这些不同形状的微柱导致基底有不同的弹簧系数（K从3到80，图1 C），而不改变其分子表面尺度特性。 当细胞在基底上贴壁生长5h后，细胞产生的牵引对微柱造成偏转（图1 B）。本文同时分析了牵引力和FAs块随时间的动态变化。作为对照实验，我们比较了细胞在平坦的聚二甲基硅氧烷（PDMS）表面的实验（图S1）。正如从以前的研究预期的那样，这些分布是偏向基材硬度较大的值。 直径2微米的微柱基底FA的大小没有影响，所以在FAS和平板PDMS基板（图S1）的分布相似。 图1通过表达YFP-桩蛋白在微柱基底REF52成纤维细胞的附着力和牵引力。（一）微柱基底的典型REF52细胞扫描电子显微照片（比例尺，15）（B）单细胞在微柱基底的变形（K为34）。 微柱阵列（红色）用Cy3纤维蛋白标记，YFP-桩蛋白是绿色。 （比例尺，15（C）连续的记录B图中 FASDE 生长和微柱位移变化图像。（比例尺，10微米）（D）显示FA上的PDMS微柱的顶部形成示意图 。（E）力（蓝色）以时间为横轴（在基板K为 34）的函数。 分析得出在细胞边缘的牵引力和FA是最大的。在大多数情况下，牵引力和FA随着时间的推移有紧密的联系（图1D和E）：力和FA都随着时间相同的增加（如基底K为34的一个基板上的例子，图1E）。我们设计了一个硬度梯度（4~80）来验证硬度对FAs的影响。对于每个时间点，我们在不同细胞的FA的 边缘取平均力F（N5）。平均牵引力（Fk），在蛋白位点施加，增长更迅速，具有较高的硬度（图2A）的硬度达到了较高的饱和度。 和牵引力相比，FA面积的增长就不太明显（图2B）。此外，由图2C可知，在硬度范围内，饱和压力Fp 正比于基底刚度。这一结果表明，饱和力对应大约0.840.03微米的基板变形恒定，与之前的其它类型细胞研究一致。有趣的是，力随时间增加的初始速率，dF/dt，还与基板的硬度呈线性变化，使微柱位移等于1.3