2.11基因工程制药-变性蛋白的复性精选.ppt

呼伦贝尔学院 高 明 华 基因工程制药 变性蛋白的复性 第十一节 变性蛋白的复性 以大肠杆菌作为表达系统生产基因工程药物时,药物 蛋白通常会形成无活性的蛋白聚体即包含体,它们的 一级结构即氨基酸序列是正确的,但空间结构错误, 没有生物学活性。需要一个复性过程才能得到生物 活性蛋白。 包含体是无定形的蛋白质的聚集,不被任何膜所包围。细胞破碎后,包含体呈颗粒状,致密,低速离心就可获得。欲获得天然活性态的目标产物,必需分离包含体后,溶解包含体并使其中的目标蛋白恢复应有的天然活性。 包含体的优势： 1. 富集目标蛋白：包含体具有高密度，易于分离纯化的优势； 2. 抗蛋白酶：重组蛋白以包含体的形式存在有效地抵御了大肠杆菌中的蛋白酶对目的蛋白的降解； 3. 对宿主毒性小：生产那些处于天然构象对宿主细胞有毒害的蛋白有优势。 一、包含体形成的原因 主要是高水平表达的结果。 在高水平表达时，新生肽链的聚集速率超过蛋白的正确折叠的速率就会导致包含体的形成。 重组蛋白在大肠杆菌中表达时，缺乏一些蛋白折叠过程中需要的酶和辅助因子，如折叠酶和分子伴侣等。 包含体的组成与特性： 一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、 RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等，环状 或缺口的质粒DNA，以及脂体、脂多糖等，大小为0.5- 1微米，无定形，难溶与水，只溶于变性剂如尿素、盐