3D细胞培养.pptVIP

3D细胞培养 简要介绍 与2D细胞培养异同 实现方法 一、简要介绍 1.细胞培养 从动物活体体内取出组织，模拟体内生理环境，在体外孵育培养，使之生存并增殖。可分为：细胞培养、组织培养、器官培养。 2.培养细胞的特性 1）.贴附 大多数哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物，体外时，这些底物可以是其他细胞、胶原、玻璃、或塑料等。 生长方式： 贴附生长型 悬浮生长型：血细胞、癌肿细胞 CHO （中国仓鼠卵巢） 在活体体内时各自具有其特殊的形态， 在体外培养时细胞常在形态上表现得比较单一化，失去其在体内原有的某些特征。 体外培养贴壁细胞形态 上皮样细胞 成纤维样细胞 形态上类似上皮细胞，扁平的多角形，细胞质中央处有圆形的细胞核，细胞间紧密衔接相连成片 形态上类似成纤维细胞，具有长短不等的数个细胞突起，多呈梭形、不规则三角形或扇形，核为卵圆形位于靠近胞质的中央，一般不靠近相连成片而是放射状 2).运动的接触抑制 正常的细胞存在不停顿的活动或移动，其外周细胞膜呈现一些特征性褶皱样活动，当两个细胞移动而互相靠近时，其中之一或两个将停止移动并向另一方向离开，在接触区域细胞膜的褶皱样活动停止，此即接触抑制，保证了细胞将不会重叠，只能形成单层。 3).增殖的密度抑制 细胞增殖形成单层时，随着细胞密度的增加，细胞变得拥挤，与培养液接触的表面区域也减少，同时培养液中的营养物逐渐消耗掉，形成的单层细胞将停止分裂。 转化细胞转化细胞或恶性肿瘤细胞与正常细胞不同，他们的接触抑制和密度抑制常常会降低。 2. 3D细胞培养 细胞在生物体内时常悬浮于 液体和胶体中，并且被其它细胞 所围绕，形成一个复杂的微小纤 维、缺口和孔洞构成的网络。其 中，氧气、激素和营养物质可以 运输传递，且废物可以过滤送走。 并且细胞能够对化学信号或其它 刺激产生反应而移动。 借助于各种填充基质（聚苯乙烯、纤维蛋 白、琼脂糖凝胶、人工基底膜、胶原蛋白等 纳米材料）在细胞培养过程中，为细胞提供 一个更加接近体内生存条件的三维环境。 可以在更为接近体内环境的前提下研究细 胞间交互作用、细胞迁移、肿瘤和癌细胞与正 常细胞之间的交互作用，以及用于以细胞为基 础的药物检测等应用。 二、与2D细胞培养异同 1、基因表达变化 Brown University GRACE et al. 成神经肿瘤细胞 SH-SY5Y 胶原蛋白 人工基底膜 6孔板 RNA 基因芯片 14,564 genes 1,766 RT-PCR In 3D cultures： upregulated：919 known,12 unknown downregulated：823 known,12 unknown encoding proteins involved in cytoskeleton, ECM, RNA metabolism, protein metabolism, signal transduction, and other functions 2. 细胞形态学变化 Brown University GRACE et al. 成神经肿瘤细胞 SH-SY5Y 胶原蛋白 人工基底膜 6孔板 细胞体、轴突形态改变 3.细胞移动模式变化 美国约翰·霍普金斯大学工程师们 细胞在二维环境中生长时，细胞下侧总与表面接触，某些蛋白质有助于形成很多尺寸大、存在时间长的灶性黏附，这些黏附可以持续数秒到数分钟。细胞通常形成一个范围更广、被称为生长瓣的扇状凸起，帮助细胞向前移动。 而细胞在三维环境中移动时，只与包围细胞的胶原蛋白网络有轻微接触，接触部位极小，用于调节细胞移动性的灶性黏附蛋白质的作用变得 不同，其外形更像纺锤状，在两端都有凸