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分子遗传学在鱼类种群鉴定上的研究进展 田彪 杨海波 （中国海洋大学，水产学院，青岛 266003） 摘 要 分子遗传学方法是对鱼类种群鉴定的重要方法。本文主要介绍SSR、AFLP、RAPD、同工酶分析和RFLP技术。近年来，分子遗传学已经成为种群鉴定研究中的热点。 关键词 分子遗传学、鱼类种群、SSR、AFLP、RAPD、同工酶、RFLP Advancement of Molecular Genetics in Fish Populations Identification Tian Biao Yang Hai bo ( Ocean University of China,Fisheries College,Qingdao 266003) Abstract: Molecular genetics is the important method of fish population identification. New technologies called PCR、SSR、AFLP、RAPD 、isoenzyme and RFLP are briefly introduced here. Molecular genetics has been the research hotspot of populations identification in recent years. Key words: molecular genetics、fish populations、PCR、SSR、AFLP、RAPD、、isoenzyme、RFLP SSR技术 简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR)简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核昔酸重复，即(CA) n和(TG) n每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目10一60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。SSR标记的基本原理：根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称为“微卫星DNA”其两端的序列高度保守，可设计双引物进行PCR扩增，揭示其多态性。 优点：(l)一般检测到的是一个单一的多等位基因位点；(2)微卫星呈共显性遗传，故可鉴别杂合子和纯合子；(3)所需DNA量少。显然，在采用SSR技术分析微卫星DNA多态性时必须知道重复序列两端的DNA序列的信息。如不能直接从DNA数据库查寻则首先必须对其进行测序。0.050 8[6],由此也显示出微卫星标记在揭示群体异质性方面的优势。 2　亲缘关系分析和个体识别 对野生及人工饲养动物进行亲子鉴定和个体识别,不仅有助于对这些动物进行保护管理,并且可以为某些动物行为生态学理论提供实际依据[7]。遗传标记在亲权关系鉴定时的应用价值可用多态信息含量、个体识别力和非父排除率来衡量。由于拥有较高的多态信息含量,微卫星标记在亲缘关系分析和个体识别中也得到了广泛的应用。在某些物种中,用其它的标记技术很难识别相互之间甚至于父子或母子之间的亲缘关系时,利用微卫星标记便可以准确地得以鉴定和区分。Innocentiis等[8]利用了4个高多态性的微卫星标记对意大利金头鲷(S paus auratus)的两个养殖群体BR1的39尾个体和BR2的59尾个体进行了遗传分析,结果表明BR2群体,分别来自于5个野生群体,而且其所占的百分比相差不大(10.3%～27.6%);BR1群体中的大部分(43.6%)个体来自于大西洋种群,剩下的来自于伊特鲁里亚海(20.5%)和撒丁运河(20.5%)。由于自然生态环境质量的下降及人类对水产品需求的增长,应用各种遗传方法改造生物的遗传结构、培育优良品种已成为人们研究的热点。人工诱导雌核发育和雄核发育的研究由于其可用于性别控制、快速建立家系,从而在多种经济水生动物中广泛开展起来。利用杂交优势进行育种也是物种遗传改良的一个重要方面,但仅从形态学、细胞学等角度有时很难区分雌核发育亲子代遗传变异关系。分子遗传标记为雌核发育群体的鉴定提供了新的方法,但是同工酶由于多态性低,RAPD、AFLP属于显性标记无法区分杂合子和隐性纯合子,从而大大限制了其应用。徐成[9]等应用在野生群体中有多态现象的8种同工酶10个基因座位对牙鲆异质雌核发育群体进行了遗传变异分析,仅有两个座位表现为多态;王伟等[10]利用9个微卫星标记对牙鲆的异质雌核发育群体进行了分析,7个座位表现为