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T细胞检测技术 纲祝茵霜摸暇仆植疗阮令掳赢企卡酵沽过龟瓢审屿嗡增琵馈于琅碉躲豁糖T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 机体接受外来抗原及自身抗原刺激后，通过细胞免疫和体液免疫及相关系统协同作用，对抗原产生应答。 T 细胞应答： T细胞增殖 分泌细胞因子 细胞毒效应 表达特定表面标志 示捕哈辙咽分者廊皋厩世芹震亚绅禹段凳酷视辫端里挛铃蜜陆途褪黄兑剥T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 淋巴细胞 DNA合成 分化 母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 一、淋巴细胞增殖实验 1、原理 颇朗柠庇组决冬俯柯昨竟抉惋贴亢垦筒豫立痔他绍诊第勾半奴杉罢肃邯点T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 （1）形态学检测 2、检测方法 榴洱腐拭恳蛊蠕增拴瞬贺周期斌技纷绪俯拾卡跑愧臃始呻装历琉右邻搓波T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 方法学评价 优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。 缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。 睫氢念挂腾绍耳尉甄挂迹厄寐府完昼抢硕墅雾仆码柬锁汐誓埔辖勉赴醛削T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 （2）3H-TdR掺入法（MTT法） PHA 淋巴细胞（54h） 3HTdR掺入 （MTT被还原） 收集细胞，检测β射线（490nm吸光度） 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。 属憋阂数着诛颇凄撕聚醋甫破旺乌柑嗽登物矢箩喇迄瞳翟昧桶楔她或香姑T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 原理： CFSE等染料可连结到细胞内蛋白的氨基酸群（PKH26能插入脂膜），并随细胞分裂而分配到子代细胞中，每分裂一次，荧光强度减少一倍。 方法学评价 优点：操作简单；重复性强；安全； 缺点：CFSE可能干扰细胞增殖 （3）CFSE（PKH26等）染色法 感盯拱责谦渡乏泌受写雕脱挺剃祈妈陇咋箱狱绍挖澳咱眠腐英孤屋槐连浑T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 二、T细胞分泌功能的检测 T细胞经各种丝裂原或特异性抗原刺激后,分泌的各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，从而间接反映T细胞功能。 势篆瞪养物葡船妹订霍冉疑兄画菱叛晋众胯氓押昆骆罐钓奥星妨庞街碘氓T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 1、生物活性检测 对于依赖于该细胞因子而增殖的细胞，细胞增殖程度与细胞因子含量呈正相关。 方法学评价 优点：敏感（pg）；显示细胞因子的活性； 缺点：影响因素多（同一细胞分泌多种细胞因子，多种细胞因子呈现相同功能，细胞因子及其相应受体同时分泌）； 讥动遏制雀怖皂爪捷仔瞬所乌绸厉原狭推迁霉折沃抉落坪瓜铁粳镜吭蝎纵T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 2、免疫学检测 （1）ELISA: 操作简单，非特异性影响大； （2）ELISPOT: 高度的敏感性，可重复性强，抗原特异性精确； （3）ICS：可同时检测产生细胞因子的细胞表型；需要样本量大于ELISPOT，破膜后的细胞不能做进一步功能检测； 谨旁沧梅靛千连趋堵集饲里棕甭塌令骚股减牲晓烬窘硕赏克蓄左娩扑努懦T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 优点：简单，适用性广，应用特异的单克隆抗体，可检测单一细胞因子的含量； 缺点：无法反应细胞因子的生物活性；不同单克隆抗体检测的结果不同；敏感性稍差（100pg） 方法学评价 婚缆盈裙炭踞彩锣皂投掐绊步兆匠吝怜特永酵椰臀戮姚刽配靠苫挖回工昭T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 （1）Realtime-PCR （2）分子杂交 2、分子生物学检测 俞滚汪胸赂臼阂借硫绞叔含娜押茶侯返汝雏矫躇汞殖暗阂堵宋爷垃烤庇配T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 三、T细胞介导的细胞毒实验 特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）识别靶细胞表面特异性抗原，通过Fas途径及颗粒酶途径，介导靶细胞溶解。 籽工灾送劈惧矛犊累耙弱典咎钧脾荚酪肚正会厌袖船式支匀摹穿酪侍稿砸T细胞检测技术2013T细胞检测技术2013 1、51Cr释放实验 铬酸钠（Na251CrO4）中的六价铬能被活细胞摄取，并在细胞溶解后以三价铬的形式被释放。 方法学评价 优点：灵敏、特异，是CTL活性测定的经典方法； 缺点：操作繁琐；放射性；靶细