3第三章临床生物化学检验常用技术廖国玲1题库.pptVIP

临床生物化学检验常用技术 第一节 光谱分析技术 一、光谱分析技术的基本原理： 第二节 电化学分析技术 溶液的电化学性质是指电解质溶液通电时，其电位、电流、电导和电量等电化学特性随化学组分和浓度而变化的性质。  电位分析法：以测定电池两极间电位差或电位差的变化来进行定量分析的电化学分析方法称电位分析法（Potentiometruy）。 离子选择电极分析法（ion selective electrode，ISE）是利用电极电位和离子活度的关系来测定被测离子活度的一种电化学分析法。 离子选择性电极分为——玻璃膜电极和敏化电极 带有对被测离子选择性响应的敏感膜，膜内外的离子活度的差异引起离子从高浓度向低浓度迁移，从而产生电位改变（电极电位）。 2. 电极电位 膜内外被测离子活度的不同而产生电位差。 3. 电极电位的测量 ISE与参比电极共同浸入样品试液中构成一个原电池，通过测量原电池的电动势E，便可求得被测离子的活度或浓度。 （一）常用的离子选择电极 1. 玻璃膜电极 敏感膜由玻璃材料制成，是发现较早的ISE。由于其敏感膜的组成不同，现已有pH、Na+、K+ 、Li+、Ag+ 、 Ca2+、iCa2+、Mg等玻璃电极。分为固态和液态两种。Na+电极就是利用玻璃膜对离子的选择性透过制成的固态电极；而K+电极是在聚乙烯膜上结合缬氨霉素制成的液态电极。 2. 气敏电极 是基于界面化学反应对气体敏感而设计的一类敏化电极。 二氧化碳气敏电极，它是由pH玻璃膜电极构成，在玻璃电极上围着蓄有碳酸氢钠薄液层的透气膜，透气膜允许二氧化碳扩散进出碳酸氢钠溶液，从而引起pH的变化，便可测定二氧化碳的含量。其他的还有测定氨、氯等气敏电极。 指示电极通常选用玻璃电极，作用是对待测气体的浓度或分压变化做出选择性响应。 3. 酶电极 是指一类将含酶的凝胶涂布于离子选择电极的敏感膜上组成的生物传感器。 在酶电极法测定葡萄糖时，葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下被氧化生成葡萄糖酸内酯和过氧化氢，而氧的消耗或过氧化氢的生成均可被氧电极或过氧化氢电极测得，从而以间接方式得知样品中葡萄糖的含量。常用的酶电极还有测定尿素、尿酸、肌酐、维生素C、乙醇、乳酸、蛋白质等酶电极。 三、电极分析法的影响因素 离子强度 络合剂 干扰物质 空气湿度、温度 其他 第四节 电泳技术 主要用于蛋白质、核酸等的分离、鉴定和定量目前已经发展到自动化的电泳系统，整个电泳过程包括点样、电泳、脱色、扫描定量都实现了自动化操作。同时用半干胶技术取代液体缓冲液，使得电泳操作更规范简便，电泳结果重现性更好。 一定的pH条件下，能吸附其他带电粒子或本身带有可解离基团的物质颗粒，在电场中必然受到电性相反的电极吸引而移动。 电泳速度（ V ）与颗粒带电量（ Q ）及电场强度（ E ）成正比，与粒子半径（ r ）和介质粘度（ ? ）成反比。 V = EQ/6πr ? 电场强度：粒子在电场中的移动速度，与电场强度成正比。 电场中因施加的端电压不同，分为常压和高压电泳。常压电泳一般在500V 以下，电势梯度约为 10～20V/cm；高压电泳一般在500V以上，电势梯度约为20～200V/cm。 高压电泳会产生大量的热，所以高压电泳仪有配套的冷却装置和安全防护装置。 缓冲液： 缓冲液应选用使分离的物质稳定，而且不与其发生反应的体系。 缓冲液的pH直接影响分子的解离和带电性质、状态，因而会影响迁移率和分离效果。 缓冲液的离子强度，一般以0.05～0.10mol/L浓度为宜。离于强度低，产热少，电泳快，区带明显扩散；离子强度高，区带尖锐，泳动距离短，产热多。 临床生物化学上分离血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋白、甲胎蛋白及同工酶等大分子物质。 （三）聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE） 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶。 以聚丙烯酰胺凝胶作为支持物是目前分辨率最高的支持物之一。适用： 1. 分离各种蛋白质组分； 2. 测定蛋白质或核酸分子量、核酸序列分析； 3. 基因变异或同功酶研究。 第五节 基因扩增技术 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,P