分子标记——SRAP.pptVIP

* 分子标记——SRAP 报告人：xxx 一、SRAP标记的概念： SRAP是一种基于PCR的新型标记，由美国加州大学作物系Li和Quiros博士提出的序列相关扩增多态性（sequence-related amplifiedpolymorphism,SRAP)。可用一对引物，但所用引物是在SSR的基础上设计的，是一种无需任何序列信息即可直接PCR扩增的新型分子标记技术，具有简便、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点。 二、SRAP标记的原理： SRAP标记原理是利用基因外显子里G、C含量丰富，而启动子和内含子里A、T含量丰富的特点设计两套引物，对开放阅读框架进行扩增。该标记具有简便、稳定、产率高、便于克隆目标片段的特点，并已被应用于图谱构建、性状的标记和遗传多样性分析。 三、SRAP标记中引物的设计与选择： SRAP分子标记的独特之处在于引物的设计。SRAP引物是基于外显子含GC而启动子、内含子富含AT的特点设计的。利用在不同个体中外显子的相对保守性及内含子和启动子的可变性，通过正反引物的组合搭配扩增出基于内含子与外显子的SRAP多态性标记。 我们本次实验主要在于引物的筛选，分别用来自不同地区的各DNA样品从现有引物中筛选出合适的引物。 四、SRAP标记25ul体系的组成： 水： 12ul 10*PCR taq buffer: 2.5ul Mg离子： 2.5ul dNTP: 2ul Me: 1ul Em: 1ul Taq 酶： 3ul 模板DNA： 1ul 25ul体系 引物 五、SRAP标记扩增程序： 保存 延伸 前三步骤循环35次 延伸 退火 变性 以上步骤循环5次 延伸 退火 变性 预变性 反应 10 72 ℃ 保存 1 1 1 1 1 1 5分钟 时间 4 ℃ 72 ℃ 50 ℃ 94 ℃ 72 ℃ 35 ℃ 94 ℃ 94℃ 温度 六、琼脂糖凝胶电泳： SRAP扩增反应结束后，扩增产物用2%的琼脂糖凝胶电泳分析多态性。 DNA分子在琼脂糖中泳动时有电荷效应和分子筛效应，在分子筛作用下，分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，从而分离核酸片段检测其大小。核酸分子中嵌入荧光染料（EB）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。 琼脂糖凝胶电泳设备： DNA琼脂糖凝胶电泳 胶图展示： 胶图展示： 条带不稳现象 电泳时注意事项： 1、凝胶一定要加热溶解完全，均匀； 2、一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看； 3、上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压； 4、如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应，中间电场比较均匀； 5、做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致； 6、加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔 内； 7、电泳开始时可采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。 。 Ending Thank you!! *