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专题二十三 微生物的利用与酶的应用内容索引考点一 微生物的利用 考点二 酶的应用 探高考 练模拟考点一 微生物的利用 1 知识回扣一、大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌(1)特性:大肠杆菌是革兰氏 性、 (代谢类型)的肠道杆菌,在肠道中一般对人无害,但若进入人的 系统,就会对人体产生危害。(2)用途:是 技术中被广泛采用的工具。2.细菌的培养和分离(1)细菌的繁殖:以 方式繁殖,分裂速度很快,约20 min分裂一次。(2)培养的方法:需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中,一般用 (工具)转移带菌的培养物。兼性厌氧阴泌尿基因工程分裂接种环答案(3)细菌分离的方法与特点分离方法特点 法操作简单 法操作复杂, 更易分开划线分离单菌落涂布分离答案3.消毒和灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或 方法仅杀死 或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、 灭菌物体表面煮沸化学高压蒸汽答案4.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验内容:将大肠杆菌扩大培养和划线分离,即用 培养基扩大培养大肠杆菌,培养后再在 培养基上划线进行分离,随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。LB液体LB固体平面答案培养基灭菌↓ ↓ ↓划线分离↓培养观察 50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿__________灭菌 将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中,水平放置,使之 形成平面在装有液体培养基的 中接种大肠杆菌,培养12 h 用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次,在固 体培养基的平板上 ,盖好培养皿 培养皿倒置(盖在下面),放在37 ℃恒温培养箱中培养12~ 24 h后,可看到划线的末端出现不连续的 高压 蒸汽倒平板三角瓶接种连续划线单个菌落答案(2)实验步骤(3)大肠杆菌分离的用途:单菌落的分离是 的通用方法,也是用于筛选 菌株的最简便方法之一。二、分离以尿素为氮源的微生物1.菌种特点含有 酶,可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2.培养基用以 为唯一氮源的培养基培养,以 培养基为对照。3.实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物,可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成 ,致使pH升高,使酚红指示剂 。消除污染杂菌高表达量脲LB全营养尿素NH3变红答案涂布分离法答案4.实验步骤制备培养基:将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中,摇匀,平放至凝固↓制备细菌悬液:用1 g土样配制不同浓度的细菌悬液↓用 分离细菌:将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中,并用玻璃刮刀涂布到整个平面上↓培养:将培养皿倒置,在37 ℃恒温箱中培养24~48 h↓观察:培养基中菌落数量5.反应的鉴定在配制培养基时,加入指示剂酚红,培养时细菌将尿素分解产生碱性的氨,使培养基上菌落周围出现 。红色的环带答案思考诊断1.从有机废水中分离分解有机物的微生物时,接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 ( )提示 异养微生物不需要光照。2.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害、( )×√提示答案3.下图中甲为划线分离法中最重要的环节,乙为操作的结果:(1)每一次划线后都要将接种环灼烧 ( )(2)除第一次划线外,每一次划线的起点都是第一次划线的末端 ( )提示 平板划线时除第一次划线外,每一次划线的起点都是上一次划线的末端,而不是第一次。√×提示答案4.筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中,尿素是唯一的氮源 ( )5.分解尿素的细菌在分解尿素时,可以将尿素转化为氨,使得培养基的酸碱度降低 ( )提示 应为升高。√×提示答案2 重难突破1.培养基的配制及划线分离操作的注意事项(1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项①倒平板的适宜温度是60 ℃左右,温度过高会烫手,过低培养基又会凝固。②平板需倒置,这样既可使培养基表面的水分更好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。(2)划线分离操作的注意事项①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。②灼烧接种环,待其冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。2.几种消毒和灭菌方法及其适用范围类型适用范围操作方法消毒方法???煮沸消毒法日常生活100 ℃煮沸5~6 min巴氏消毒法不耐高温的液体 70~75℃煮30 min或80 ℃ 煮15 min 化学药剂生活活体、水源等 擦拭如用酒精擦拭双手, 用氯气消毒水源等紫外线房间、仪器设备紫外线照射30 min灭菌方法灼烧接种工具、接种时
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