溶菌酶作用机理.ppt

简介 常见分类 目前大多根据来源进 行分类，其中研究最多、最具代表性的是c-型溶菌 酶，鸡蛋清中天然c一型溶菌酶含量最丰富，c一型溶菌酶也存在于多种动 物的组织和分泌物中 。 g一型溶菌酶，无脊椎动物中有i一型溶菌酶，此外，还 有植物源溶菌酶和微生物源溶菌酶。而在病毒中发现的v一型溶 菌酶具有转糖苷酶的性质，区别于其他种类的溶菌酶。 虽然这些溶菌酶的氨基酸组成和排列不同， 但其活性中心的活性位点非常保守，因此均具有水 解功能 作用部位（图示） β- 1 , 4 糖苷键 底物简介 肽聚糖是细菌细胞壁的主要成份，它是由 N- 乙酰氨基葡糖乳酸NAM、N- 乙酰氨基葡糖NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成，NAM与NAG通过β-1.4糖苷键相连。 肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接，NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构，作为细胞壁的骨架。 底物简介 革兰氏阳性菌（G+），如藤黄微球菌、枯草杆菌或溶壁微球菌等，其细胞壁几乎全部由肽聚糖组成。 革兰氏阴性菌(G-)，如大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌等，细菌只有内壁层为肽聚糖。 该酶对革兰氏阳性菌G+有分解作用。 革兰氏阴性菌G-也有一定程度溶解作用，其最有效浓度为0.05%。 因此，溶菌酶对于破坏G+细菌的细胞壁较G-细菌强。 催化过程的要点：（The Critical Elements of This Catalytic Scheme） ① 一般性的酸催化（General acid catalysis） 未离子化的Glu35，它离糖苷键氧原子3?，一个氢离子从它转移出来； ② 促进碳正离子中间物的形成 两个稳定碳正离子中间物的因素显著的促进此酶催化反应 (a) 一般酸性催化 带负电的基团ASP52上的羧基，离碳正离子中间物约3?远。因此，存在着静电相吸的因素，它和D环上C1正电荷静电相互作用，一个氢离子从它那里转移出来。 (b) 椅式扭曲到半椅式（促进碳正离子中间物的形成） D环必须从习惯的椅式扭曲到半椅式，NAG的6聚体才能适应活性部位的裂缝。因为半椅式的几何结构显著的促进碳正离子的形成，因而促进了催化过程。在半椅式，C1，C2，C5和O原子成平面，使正电荷被C1和环O共享。 新进展 但随着溶菌酶在不同 组织中参与机体防御机制的作用证实，表明溶菌酶 的作用机制首先依赖于其特有的结构，然后才是直 接杀菌作用。 最新研究表明，热变性后的溶菌酶仍然具有抑 菌作用，即溶菌酶能够通过非酶途径杀灭革兰氏 阳性和阴性菌 。 新分类 新作用机理 溶菌酶可以对微生物相关结 构进行识别，通过结构改变发挥杀菌作用。 Ibrahim等用梭菌蛋白酶水解蛋清溶菌 酶，发现溶菌 酶的一个 螺旋一环一螺旋 基元结构域为活性 位点，其中包括两个(一螺旋结构和一个连接环)。 该区域对革兰氏阳性和阴性菌及真菌～白色念珠菌均有杀菌活性。其中N一端螺旋对革兰氏阳 性菌有特效，而C一端螺旋对革兰氏阳性和阴性菌都 有效。 外膜作用机制 人工合成的HLH多肽和C一端螺旋区 域能通过自身促进吸收穿透外膜并用形成通道的 方式破坏内膜。 HLH结构中的a一螺旋发夹抗菌多肽以自身促进吸收途径穿透大肠杆菌外膜 。 作用机制是：抗菌肽分子中的多价阳离子与结合在脂多糖表面的二价阳离 子发生交互作用，由于这些多肽与脂多糖的亲和力 比原来结合在脂多糖上的Ca 和Mg 的亲和力 高三个数量级，可以大量地进行竞争性取代，导致正常细胞膜屏障的破坏，产生暂时性的“溃穴”，使 各种分子如疏水性化合物和小分子蛋白和／或抗菌 药物进入胞内，更为重要的是促进抗菌肽本身大量 地吸收进人胞内(这就是自身促进吸收) Ibrahim等还通过定点突变研究了酶活性位点 改变而结构不变时对鸡蛋c一型溶菌酶抑菌作用的 影响，认为溶菌酶的抗菌作用随构象的改变而改 变，与酶活性关系不大。 溶菌酶杀灭革兰氏阳性 菌，除水解肽聚糖外，还对微生物相关结构进行识 别，其中的特定结构诱导细菌产生自溶酶，以非酶 机制激发微生物产生自溶酶而杀菌，但此机理有待 于进一步研究。 * * 溶菌酶，又称胞壁质酶，微生物细胞壁的水解酶，是一种碱性蛋白质 分 子 量 为14338Da，由129个氨基酸残基组成 单 一 肽 链 ，整个分子大小约为.5*3*3nm. 等电点为 10.7-11 分子内含 4对二硫键 催化过程的要点： （The Critical Elements of This Catalytic Scheme） 正常的糖环：椅式构象 两个糖环 交联肽 扭曲了的糖环，