基因工程复习内容整理摘要.docVIP

第二章 基因操作的主要原理 1、核酸凝胶电泳的原理及分类？ 在生理条件下，核酸分子中的磷酸基团是离子化的，所以DNA和RNA实际上呈多聚阴离子状态。将DNA、RNA放到电场中，它就会由负极→正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移率取决于核酸分子本身的大小和构型。分子量较小的DNA分子，比分子量较大的分子具有更紧密的构型，所以其电泳迁移率也就比同等分子量的松散型的开环DNA分子或线性DNA分子要快些。 分类：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳。 2、影响DNA迁移率的因素有那些？ DNA分子量大小；DNA的构象；凝胶的浓度。 3、EB的作用原理。 一种具扁平分子的核酸染料，可插入到DNA或RNA分子的碱基之间。在300nm紫外灯照射下发射出荧光。 4、核酸分子杂交所依据的原理是什么？有那几种杂交方式？ 带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA，当它们混合在一起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构。 杂交方式有:DNA/DNA印迹杂交——Southern Blotting；RNA/RNA印迹杂交－Northern blotting；斑点印迹杂交和狭线印迹杂交；菌落或噬菌斑杂交。 5、细菌转化的技术方法。 原生质体转化法、化学转化法、电穿孔法。 6、Sanger的双脱氧链终止法的技术路线？ 利用了DNA聚合酶的两种特性：第一，它能够利用单链的DNA做模