第三章。载体.pptVIP

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2016-12-07 发布于重庆
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第三章。载体.ppt

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第三章。载体

* * 第三章基因克隆的载体在这三类载体中，它们之间各有特点和优越性。目前根据其基因工程的目的不同，则选择不同的物质作为载体。在基因工程中作为外源DNA的载体的有: 质粒噬菌体病毒它们共有如下相同的性质：能自我复制可导入宿主细胞便于选择第一节质粒载体复制基因选择性记号克隆位点不同质粒DNA的分子量差异较大，最小仅能编码2-3种蛋白质分子，其分子量为100KD而最大的质粒分子量可达105KD以上。有些质粒用于基因克隆载体，有的则不适用，凡经改建而适于作为基因克隆的所有质粒DNA分子，都必定包括如下3种共同的组成部分，即：若干种质粒的特性质粒分子量106Dal 拷贝数/染色体自我转移能力记号与表型 CoLE1 4.2 10-18 不能大肠杆菌素区 (膜变化) CoLE2 5.0 10-48 不能 E2（DNase） CoLE3 5.5 10-18 不能 E3（RNase） F 62 1-2 能 F性别 F′Lac 95 1-2 能 F性别 Lac 操纵子 R100 70 1-2 能 Cmlr Strr Sulr Tetr R64 78 1-2 能 Tetr Strr R6K 25 12 能 Ampr Strr RSC101 5.8 1-2 不能 Tetr RBR322 2.9 20 不能 Ampr Tetr CmCr-抗氯霉素 Strr-抗链霉素 Sulr-抗磺一、质粒DNA的复制与拷贝数的控制在培养基中加入蛋白质合成抑制剂氯霉素，使其浓度达到可以阻止染色体DNA合成的程度，此时寄主染色体DNA的合成便被抑制了，而质粒的DNA则照样能够继续进行复制，直到每个细胞大约累积了1000到3000个拷贝为止。 1. 多拷贝质粒DNA复制的特性(15-18个拷贝) 2. 质粒DNA拷贝数的控制如ColE1质粒上具有一个EcoRI识别位点，可插入外源DNA，外源DNA的插入并不影响其复制能力和生产高拷贝数，但却失去了产生大肠杆菌素E1的能力。因为这种性状特征上的显著差别，为鉴定重组体ColE1DNA的转化提从了有效的选择标记。细胞内有一种阻遏蛋白，它是由质粒DNA编码的，它能够同DNA复制起始点结合而抑制其复制的活性。 3. 杂种质粒DNA拷