基因表达沉默技术解剖.pptVIP

药学系药物基因组学教研室 2010.06.18 教学内容及要求 参考资料 《基因工程及其分子生物学基础-基因工程分册》，北京大学出版社，静国忠编 自备材料（个人实践经验） RNA 干扰 (RNA interference, RNAi):由小双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。 小干扰RNA: 具有干扰功能的这种短双链RNA就称为小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA)。 随后陆续发现RNAi也存在于水稻、烟草、果蝇、小鼠及人等几乎所有的真核生物中。 1）靶序列的调出 2）利用免费设计软件进行siRNA设计 软件的选择原则 1、选择可读框内、翻译起始位点之后50～100nt的序列作为靶序列； 2、选择的靶位5’端之前的两个碱基为AA； 3、GC含量控制在35%～65%,最好50%左右； 4、碱基数目控制在19～21nt； 5、避免连续3个或3个以上的相同碱基； 6、避免重复序列或回文结构以免形成发夹状结构； 7、靶序列同数据库进行BLAST同源性比对。 3）siRNA合成或表达 4) siRNA working? 5)合成or构建载体？ 1978年，Stephenson 和Zamecnik首次报道了反义寡脱氧核苷酸可抑制劳斯肉瘤病毒RSV的复制现象。 1984 年，Izant weintraub提出了“反义核