基因工程6-DNA序列解剖.pptVIP

第九章 DNA序列分析 * * * * * * DNA双螺旋结构解明之后，研究基因组中每一个基因的作用就成为了生物科学工作者的主要课题。为此，首先必须设法知道目的基因的核苷酸排列顺序，即基因测序。 DNA测序方法： Maxam-Gilbert 化学降解法 双脱氧链终止法（Sanger酶学法） 第一节 Maxam-Gilbert 化学降解法 1977年，A. M. Maxam 和W. Gilbert首先建立了DNA片段序列的测定方法，由于该方法是用特定化学试剂修饰不同碱基，并在相应碱基处切断DNA片段而进行系列分析的，故称之为Maxam-Gilbert 化学降解法。 一、基本原理 将待测DNA片段的5’端磷酸基团作放射性标记，再分别采用不同的化学方法对特定碱基进行化学修饰并在该位置打断核酸链，从而产生一系列5’端被标记的长度不一且分别以不同碱基结尾的DNA片段，这些以特定碱基结尾的片段群通过并列点样的方式用凝胶电泳进行分离，再经放射自显影，即可读出目的DNA的碱基序列。 直接或间接特异性识别4种碱基 生成其始于固定起点和终止于特定碱基的一组核苷酸片段 特定化学试剂可对碱基进行特异性修饰 在修饰碱基处（5’或3’）打断磷酸二酯键 二、化学降解测序法的基本步骤 对待测DNA片段的5’端磷酸基团作放射性标记； 用化学修饰剂修饰特定碱基；