土源性线虫和食源性寄生虫检测方法_培训课件.pptx

土源性线虫和食源性寄生虫检测方法2016年5月29日一、改良加藤厚涂片法二、透明胶纸肛拭法三、试管滤纸培养法四、土壤中钩蚴分离改良方法五、土壤中人蛔虫卵检查及活力测定方法六、猪体囊尾蚴检测方法七、肉类中旋毛虫检验方法八、囊尾蚴病和旋毛虫病血清学检测方法一、改良加藤厚涂片法背景加藤厚涂片法是50年代日本人Kato首先提出，是用在甘油透明液中浸泡过的亲水玻璃纸替代盖玻片。七十年代Katz设计出圆孔卡片用于定量，此后称为改良加藤厚涂片法。八十年代起，中国疾控中心寄生虫病所对定量板进行了多次改进。检出率高，操作简便、适用于粪便中各种寄生虫卵检测。1988年至今我国实施的大规模寄生虫病调查，粪检用的都是该方法。一、改良加藤厚涂片法材料透明液（蒸馏水100ml＋纯甘油100ml＋3%孔雀绿1ml);亲水性透明玻璃纸(25×40mm)需在透明液中浸泡24小时 以上；尼龙绢片（80目）裁剪大小5×5cm；圆台形孔塑料定量板；塑料刮片。其他：原始登记表、镊子、剪刀、记号笔、标本盒、旧报纸、吸水纸、光学显微镜和一次性手套等。一、改良加藤厚涂片法步骤一、改良加藤厚涂片法1）每份粪样取2张载玻片进行编号（与待检粪样的编号相同）2）将80目的尼龙绢摊在粪样上，用刮棒压平后刮取粪便。3）将定量板放置玻片中央，定量孔小孔朝上，将粪样填满、抹平。一、改良加藤厚涂片法4）垂直向上移去定量板，将亲水玻璃纸抖掉多余水分，盖在粪样上；5）取另一张载玻片轻压粪样，均匀展开至玻片边缘；6）待加藤片透明后镜检一、改良加藤厚涂片法镜检记录下每张片子的各种虫卵数;当每个视野中的蛔虫卵数在10个以上时,可固定抽查10个视野,将 10个视野的虫卵平均数乘以全片的视野数，得到全片虫卵数近似值。例：抽查的10个视野蛔虫卵数相加为366，全片粪膜视野数为78，则全片粪膜蛔虫卵总数（ 366÷10 ）×78＝2854.8≈2855一、改良加藤厚涂片法注意事项（1）受检者需提供足量的粪样，约50g（鸡蛋大小）。（2）加藤片的粪样应厚薄均匀，不能逸出玻片边缘。（3）涂片放置时间长短是关键。一般室温25℃、75％湿度下，涂片放置不宜超过2小时。只要透明了，就应及时镜检，否则透明过度，薄壳虫卵易变形看不清楚。（4）登记粪检结果时，分别填写每张加藤片的各种虫卵数（不要乘24）。（5）调节显微镜左右目镜的距离和焦距。二、透明胶纸肛拭法材料透明胶贴载玻片二、透明胶纸肛拭法检测步骤1）在胶贴纸上记录受检者编号等信息，将胶贴纸有粘性一面向外；二、透明胶纸肛拭法2） 用食指和拇指分开受检儿童的肛门，尽量分开肛周褶皱 ，将透明胶贴纸在肛门口反复粘压。二、透明胶纸肛拭法3)将采样后的胶贴纸贴回载玻片，抹平，减少气泡产生。二、透明胶纸肛拭法要求3～9岁儿童只检查1次。虫卵不计数，只记录阴性、阳性。蛲虫有夜间排卵的习性,采样宜在清晨,采样前不要洗澡或清洗肛门,以免漏检。三、试管滤纸培养法材料锥形离心管（长11.5cm、管口内径1.5cm）。试管架、吸管、载玻片、盖玻片(20×20mm)、小镊子、滤纸条（宽度略大于试管直径，长度略短于试管，约9.0×1.6cm，滤纸条要用剪刀剪，防止毛边）、显微镜、温箱、解剖镜或放大镜、竹签、旧报纸、橡皮筋。三、试管滤纸培养法步骤（1）每管内加入冷开水约2ml。（2）将滤纸条沿长轴纵折，以保持挺直。（3）用竹签取0.5g粪便，涂于滤纸中段，左右各留0.5cm，上端留1cm，下端留约2cm空白，不涂粪便。（4）将涂布粪便的滤纸插入管中，但不应该接触管底，滤纸条插入管中的深度以水只接触纸条而不碰到粪便为宜。（5）在培养管上贴上标签并写上受检者的姓名和编号。（6）每30~50管用橡皮筋扎住，上下均包以旧报纸，再用橡皮筋扎紧。三、试管滤纸培养法（7）将培养管置于31℃温度中培养4天，或置于26~30℃温度中培养6~8天。以保证所有幼虫都有足够的时间发育到感染期幼虫。（8）分离幼虫：沿管壁加入45℃温水，淹没滤纸上的粪便，1小时后用镊子取出滤纸条，弃去。将培养管静置1小时，用吸管吸去上清液，幼虫留于管底0.5ml或更少的水内。（9）用放大镜(4×以上)或解剖镜以侧照法检出沉淀物内有无活的幼虫。如有活的幼虫，可先将管底部浸于50-60℃的热水内抑制活动。（10）将沉淀物置于低倍镜下(10×10)检查，为使可折光的幼虫易于观察，检查时要尽量缩小光圈减弱光线，如需详细辨认幼虫，可加上盖玻片，在高倍镜下(40×10)检查，必要时可用目镜测微计测量幼虫。三、试管滤纸培养法要求每份样本鉴定钩蚴100条，不足100条，全部鉴定记数。发现其他种类的线虫只记录虫种名不记数。如遇土壤污染，培养中可出现自由生活的线虫成虫和幼虫必须与人体寄生虫的幼虫相鉴别。若幼虫蠕动过快，难于观察，可用以下方法制动1)将载玻片放在9