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现代生物科技专题一 基因工程 一．基因工程 1、（a）基因工程的诞生 （一）基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过 ，赋予生物以 ，创造出 。基因工程是 在 上进行设计和施工的，又叫做 。 2、（a）基因工程的原理及技术 原理：基因重组 技术：（一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”—— （1）来源：主要是从 中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种 的核苷酸序列，并且使每一条链中 部位的两个核苷酸之间的 断开，因此具有 性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 和 。 2.“分子缝合针”—— (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合 键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的 之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合 ，但连接平末端的之间的效率较 。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将 加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接 的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”—— （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于 ，并具 有 的双链 DNA分子。 （3）其它载体： (二)基因工程的基本操作程序 第一步： 1.目的基因是指： 。 2.原核基因采取 获得，真核基因是 。人工合成目的基因的常用方法 有_ 和 。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理： （2）过程：第一步：加热至90～95℃ ；第二步：冷却到55～60℃， ； 第三步：加热至70～75℃， 。 第二步： 1.目的：使目的基因在受体细胞中 ，并且可以 ，使目的基因能够 。 2.组成： ＋ ＋ ＋ （1）启动子：是一段有特殊结构的 ，位于基因的 ，是 识别和结合的部位，能驱动基因 ，最终获得所需的 。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的 ，位于基因的 。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中 ，从而将 筛选出来。常用的标记基因是 。 第三步： 1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 ，其次还有 和 等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 。此方法的受体细胞多是 。 将目的基因导入微生物细胞： 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步： 1.首先要检测 ，方法是采用 2.其次还要检测 ，方法是采用