202实验三通课课件.pptVIP

五、实验结果： 结核分枝杆菌染成红色，菌体细长，有时微弯，常堆积成团，排列无序，偶可见呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。 六、注意事项： 1.初染加热的温度，勿沸腾 2.及时补加染液，以免染液干涸 3.待标本冷却后再冲洗 4.脱色时，脱色剂脱色时间宁长勿短 5.为了防止实验室感染，可先将待检的结核分枝杆菌标本高压灭菌后，涂片染色。这样既安全又不影响实验结果 实验报告 1. 肠道致病菌的鉴定结果和鉴定依据； 2.抗酸染色 简述抗酸染色原理、方法和结果。 绘制抗酸染色油镜下观察图。 下周实验内容 1.病毒的接种（小鼠和鸡胚） 2.真菌菌落的形态观察 3.考试 肠道致病菌的鉴定药敏试验抗酸染色 主讲：周亚莉 　 内 容 提 要 一 肠道杆菌的鉴定（2学时） 革兰染色（1片/2人），双糖铁培养 基接种（8支/室），玻片凝集试验（1片/2人） 二 药敏试验（0.5学时） 介绍及展示示教平板 三 抗酸染色（2.5学时） 示教，1片/人 病原菌的检验程序 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 动物试验 分析鉴定 革兰染色 观察菌落特征 一、致病性肠道杆菌的鉴定 粪便 生化反应 SS琼脂平板 （双糖含铁培养基） （必要时进行增菌培养） 得出结论 革兰染色 菌落观察挑取可疑菌落 纯培养 血清学鉴定 SS培养基 含有胆酸盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长. 含有中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红. 常用于培养肠道致病菌. SS培养基上各菌的生长特点 大肠杆菌：粉红色大菌落 伤寒杆菌：无色细小半透明菌落 福氏痢疾杆菌：无色细小半透明菌落 双糖铁培养基的特点 含有乳糖和葡萄糖：产酸产气 含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成 硫化氢，可形成黑色沉淀 酚红指示剂： 酸：黄 碱：红 用于观察细菌是否产生硫化氢及对糖的发酵能力 1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验）,是斜面及底层均呈黄色并有气泡。 2) 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖,不发酵乳糖,分解葡萄 糖产的酸使培养基pH下降,酚红指示剂变黄,但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%,在斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸,且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作用,使斜面变红,而底层则为黄色。 另沙门菌分解含硫氨基酸，有黑色沉淀。 双糖铁培养基上各菌的生长特点 双糖铁培养基上各菌的生长现象 双糖铁培养基接种方法 将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜面 ），37度培养24小时，第二天观察结果。 原理: 颗粒性抗原(未知细菌)+已知抗体(诊断血清) 材料：伤寒血清、待检菌 方法:玻片分为左右两区，每区各加伤寒诊断血清 1滴, 挑取可疑菌落（黑色或无色菌落、粉红色大菌落）培养物少许，于血清中研磨成均匀乳状，轻轻摇动玻片，经1-2min后观察结果。 结果:凝集+ ，待测菌 为伤寒杆菌 不凝集 -，待测菌 不是伤寒杆菌 血清学实验：玻片凝集反应 本次实验所做内容 ⑴观察菌落特征（SS平板） ⑵取可疑菌落做革兰染色 2片/台 ⑶将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜面 ），37度培养24小时，观察结果. 1支/台 ⑷伤寒杆菌玻片凝集试验 2片/台 (5)得出结论 目的要求 1.掌握纸片扩散法药敏试验的原理及结果判定 2.了解药敏试验的操作方法和意义 二 药敏试验（0.5学时） 原理 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 主要材料 1.大肠杆菌、金黄色葡萄球菌普通琼脂平板 2.含抗生素的滤纸片： 青霉素、氯霉素、链霉素、庆大霉素 方法 标记分区 密涂接种 贴片 培养 结果观察 青霉素 链霉素 庆大霉素 氯霉素 结果 抑菌圈 抑菌圈直径 一、实验目的： 1、掌握细菌涂片标本的制备 2、掌握抗酸染色的原理和方法 三 抗酸染色（Acid F