体外受精与核移植动物.ppt

（3）电泳分离法 利用精子表面电荷差异采用电泳进行分离。精子 带负电荷，Y精子负电荷略小于X精子，因此在中 性缓冲液中，X精子向阳极移动的速度较快。 优点是操作方便，缺点是分离效率不高。 （2）免疫学分离法 Y精子上存在雄性特异性组织相容性抗原（H-Y 抗原），利用H-Y抗体检测精子质膜上是否存在 HY抗原，以此分离X精子（H-Y抗原阴性）和Y 精子（H-Y抗原阳性）。 主要有免疫亲和柱层析法和免疫磁珠法。目前这 个方法仅限于小规模实验研究，准确性较低。 （4）流式细胞仪分离法 根据X、Y精子上DNA含量的微小差别，通过流 式细胞仪(Flowcytometer)进行分离。 首先将精子稀释并与荧光染料Hoechst 33342混 合，这种染料可以定量地与DNA结合。精子通过 检索仪时被激光束激发，由于X精子比Y精子含较 多的DNA，X精子放射出较强的荧光信号。 放射出的信号通过计算机系统分辨X精子和Y精子。 借助两块各自带正电或负电的偏斜板，把X或Y精 子分别引导到2个收集管中。 2 胚胎移植前性别鉴定 细胞生物学方法：通过判定胚胎细胞性染色体是 Ｘ还是Ｙ来鉴定胚胎的性别。 分子生物学方法：根据Y染色体上的SRY基因的 有无进行鉴别，可以采用PCR或FISH等分子方 法进行确定性别。 生化免疫学方法：H-Y抗原检测法 对于人类，世界范围内不孕夫妇占10％左右，中国约有4000万夫妇不能孕育，需要建立人工助孕技术。 视频：体外受精婴儿 /geo/science/v/2009-08- 30/151244.shtml 动物人工繁殖的技术方法一览： 体细胞、成体干细胞 雌性动物 雄性动物 核移植 卵子 精子 人工授精 体外受精 胚胎 重组胚 有性生殖途径 无性生殖途径 胚胎细胞 胚胎培养 胚胎冷冻 胚胎分割 胚胎移植 受体动物 发育出生 克隆有关伦理学问题 讨论 讨论题： 1-动物可以无休止地被克隆吗？ 2-你是否同意生殖性克隆？无性生殖是否是 人类的倒退？ 3-英雄、伟人可以通过克隆再生吗？ 问题1： 克隆羊多莉刚出生时，它的染色体显示已经有 好几岁了。2003年它已经永远离开了我们。6 岁。供体6岁。 苏格兰罗斯林研究院的科学家们对多莉的染色 体做了仔细的研究，发现其染色体末端端粒比 同龄的普通绵羊短。端粒是决定细胞老化的主 要因素，端粒越短的细胞越接近死亡。变短的 端粒或许表明遗传的蓝本会随着时间流逝而老 化，无休止地克隆一个动物是不可能的。 关于端粒 每一条染色体的末端都有特殊的结构叫端粒 (telomere)。 它可以保持染色体的稳定性，丢失了端粒的染 色体很容易和别的染色体相接形成双着丝粒染 色体或自身首尾相联形成环状染色体，前者在 减数分裂后期会产生染色体桥(chromosome bridge)，最终引起染色体的重复与缺失。 生殖细胞可以重建与延长端粒的DNA；而体细胞 则随着复制次数的增加端粒DNA会逐渐缩短。 Harley等（1989年）用人的端粒重复片段为探针 对胎儿、新生儿、青年和老年人的细胞株的端粒 长度进行了研究，发现随着年龄的增加，人成纤 维细胞端粒的长度不断下降。因此端粒DNA可能 决定了细胞的寿命，并与细胞的自然凋亡与癌变 密切相关。 1990年Harely等则认为端粒的长度可反映细胞有 丝分裂的次数。端粒象是细胞分裂的“计数器”。 问题2： 许多国家出台法律禁止生殖性克隆。 有性生殖是历史进化的结果，利于种族繁衍和生 存，以及优良性状的形成。选择无性生殖——克 隆的方式不利于遗传多样性的保护。从有性繁殖 到无性繁殖，就进化而言是一种退化。 克隆动物存在的问题 （ 1） 技术尚不成熟 得到的克隆动物具有极大的偶然性和随机性。迄今为止， 克隆试验的成功率始终很低。例如，在培育多莉的过程中 ，科学家共克隆出２７７个绵羊胚胎，最终成功使母羊受 孕并生产的只有多莉一个。 目前，多莉羊的制备还不能重复，更不能肯定克隆多莉羊 的方法也适用于其它动物或其它不同组织器官的细胞。 （2） 遗传、疾病问题 克隆动物夭折率高，不少克隆动物天生患有疾病 或体形过大。 克隆羊和克隆牛都有体形过度庞大的问题。该缺 陷在克隆鼠身上也存在。克隆牛、羊、猪都存在 发育不良、免疫系统 缺陷和心肺功能不健全的问 题。 克隆动物没有遗传物质的交流和互补，将会加剧 一些遗传疾病的发生。 （ 3） 克隆人带来的社会、伦理学问题 人类胚胎克隆与克隆人 2001年研究人员将一枚卵细胞中 的DNA全部剔除，然后用一枚成 年人皮肤细胞中的细胞核替代上 述DNA，得到3个早期胚胎，其中 两个发育到4细胞阶段，另一个至 少发育到6细胞阶段。 证明人体单个细胞的遗传物质能 被诱导发育成为幼胚胎，因此这 项研究被认为是向着克隆人的方