醋酸纤维薄电泳法分离血清蛋白质.pptVIP

* * * * 实验四 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 一、目的 二、原理 电泳是指带电粒子在电场中向着与其电性相反的电极移动的现象。蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为阳离子，在电场中向负极移动。在pH大于其 1、了解电泳分离蛋白质的一般原理。 2、掌握醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白质技术。 等电点的溶液中，蛋白质为阴离子，在电场中向正极移动。血清中含有多种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH值的缓冲液中所带净电荷不同，因此在电场中移动的速度也就不同，故可利用电泳法将它们分离。 本实验以醋酸纤维薄膜作为支持物，于浸有缓冲液的薄膜一端加微量血清，膜两端连接于缓冲液。所用缓冲液的pH为8.6，大于血清中各种蛋白质的等电点。因此，各种蛋白质皆带负电荷，在电场中向正极方向泳 动，因泳动速度不同而被分离。从正极端起，依次为清蛋白、α1- 、α2- 、β-和γ-球蛋白，将蛋白质染色后，可按染色区带位置进行定性观察，也可对各条色带进行定量测定。 正常人血清醋酸纤维薄膜电泳示意图 1为清蛋白，2，3，4，5分别α1-，α2-，β-及γ-球蛋白，6为点样原点 。 1、准备： （1）浸泡：取8cm?2cm醋酸纤维薄膜条一张，浸入pH8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中，浸泡约30min，完全浸透后，用镊子轻轻取出，夹在滤纸中吸