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李斯特菌的快速检测方法 专 业：食品科学 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2 以分子生物学为基础的检测法 目 录 以免疫学为基础的检测法 展 望 快速检测方法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 5 以免疫学为基础的检测法 免疫学 快速检测法 单克隆抗体酶联免疫法 酶联免疫荧光检测法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. * 在1992年，Besson等人首次发现一株能稳定分泌抗单核细胞增生性李斯特菌的特异单克隆抗体的细胞株EM-TGI，以此特异性单克隆建立的夹心ELISA方法能20~24h内检出含8~10个/g的样品。这是病原性李斯特菌检测中重大突破，第一次利用酶联免疫方法把单核细胞增生性李斯特菌和非致病性李斯特菌分开。 单克隆抗体酶联免疫法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. * 单克隆抗体酶联免疫法 以后陆续的有利用单克隆抗体ELISA检测的报道，有李斯特菌属特异表位单克隆抗体，它们所针对的是表位为菌体表面蛋白质分子量为3000~3800KD，用此表位单克隆抗体构成的夹心ELISA检测技术能在预增菌后24h报告结果，且最低检测浓度为5×105个/mL。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. * 1985年，Mclaulin等人采用酶联荧光检测法，将异硫酸荧光素结合到李斯特菌的两株单克隆抗体上，对李斯特菌进行了直接的荧光检测，证实了香软干酪等动物性食品中李斯特菌的检测只需2h可完成。焦新安在1994年研制了3株具有特异表位的单克隆抗体C11、B18、B5，建立了快速检测李斯特菌的间接免疫荧光和ELISA，节省了检测的时间。 酶联免疫荧光检测法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. * 酶联免疫荧光检测法 采用酶联荧光检测法制成的VIDAS检测伐，可实现全自动检测，自动培养、选择菌，并分析，全部结果都由机器自动输出，快速、简便、省时。翁文川等人在VIDAS自动检测仪器上API Listeria鉴定卡，不仅可以快速检测出李斯特菌而且还可以李斯特菌属。准确、快速、方便且具有广谱性。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 5 以分子生物学为基础的检测法 分子生物学 快速检测法 寡聚核苷酸DNA探针杂交检测法 PCR技术检测法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 寡聚核苷酸DNA探针杂交检测法 对于血清型的李斯特菌在已知某一序列的保守性，可设计出人工合成的短聚核苷酸。如Datta等人在1988年克隆出单核细胞增生性李斯特菌β溶血素基因，一个50bp大小的基因片段，把此片克隆进M13噬菌体载体并测定它的核苷酸序列，依其序列合成它们的4种寡聚核昔酸探针,以32P标记该探针,经斑点杂交实验证实该探针只与单核细胞增生性李斯特菌反应,而与其他种的李斯特菌反应呈阴性,表现出良好