AFP启动子介导胸苷激酶表达载体的构建及其特异性表达.docVIP

AFP启动子介导胸苷激酶表达载体的构建及其特异性表达 　　作者：岳殿超1， 李宝金2， 徐辉雄1， 张泷涓3， 王 瑛4， 吕明德4 作者单位：(1. 中山大学附属第一医院影像医学部， 广东 广州510080; 2. 广州市第八人民医院肝胆外科， 广东 广州518080;3. 中山大学附属第一医院外科实验室， 广东 广州510080; 4. 中山大学附属第一医院超声科， 广东广州510080) 　　【摘要】 【目的】 构建AFP启动子介导HSV-TK基因表达载体，并对其在肝癌细胞中特异性表达进行分析。 【方法】 采用PCR法扩增人AFP基因启动子。回收纯化后克隆入pBluescript II KDR-TK相同克隆位点，切取AFP-TK片段，然后通过酶联反应插入到pEGFP-C1中，构建成pEGFP-C1-AFP-TK。对获得的片段进行鉴定、细胞靶向和外源基因表达的鉴定。【结果】序列分析表明，该启动子含300 bp核苷酸，与已报道的序列比较，100%相符。限制性酶切分析，重组质粒pEGFP-C1-AFP-TK已经克隆AFP启动子。RT-PCR及Western blotting分析pEGFP-C1-AFP-TK转染后的HepG2细胞后，表明TK基因在mRNA水平上能有效的表达，裂解后的HepG2细胞膜蛋白中有相对分子质量约61 ～ 83 ku大小的特异性条带。 【结论】